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T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

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更新時間:2022-04-13 09:41:43瀏覽次數(shù):255

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次
貨號 FS-P013324 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅供科研    
T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒正在出售的產(chǎn)品:DMEM / F-12(1∶1)培養(yǎng)基規(guī)格:500ml
IMDM培養(yǎng)基規(guī)格:500ml
Leibovitz’s L-15培養(yǎng)基規(guī)格:500ml

詳細介紹

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

50次

FS-P013324

組成及試劑配制:

1,、酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,,請臨用前15分鐘內(nèi)配制,。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),,分別配制成200 U/L,,100 U/L,50 U/L,,25 U/L,,12.5 U/L,6.25 U/L,,3.12 U/L,,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,,混勻即可,,其余濃度以此類推。

3,、 樣品稀釋液:1×20ml,。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml,。

QQ截圖20201022162313.png 

實驗外包:

1.基因組學(xué):基因芯片,、SNP檢測、DNA甲基化檢測,、生物信息學(xué)分析

2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片,、LncRNA芯片,、表達譜芯片、RNA-seq

3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE,、SILAC、iTRAQ,、TMT,、Label-free、MRM

4.基因檢測:DNA/RNA提取,、RT-PCR,、Real-timePCR

5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip  EMSA,、CHIP,、免疫熒光、ELISA

6.病理檢測:HE染色,、特殊染色,、組織切片、免疫組化,、流式細胞分選

7.代謝組學(xué):GC-MS,、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型:原代細胞,、細胞模型,、動物模型構(gòu)建

使用方法:

一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標準品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管,,分別為7,,6,5,,4,,3,2,。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,,下同)。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,,充分震蕩1分鐘,,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。

5. 換槍頭,,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。

6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,,充分震蕩1分鐘,,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用,。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。

二,、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品,,必須設(shè)置N+2個提取,

多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),,

一個是NC(樣品制備陰性對照),。

可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,,以此作為PC。另外用水作為NC,。如果每次制備需要200μL樣品,,則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA,,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒,。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,,在樣品制備室進行)

10. 如果只做1次重復(fù),,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,,1個用于PCR陰性對照,,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),,則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍,。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

 

 

 

 

 

 

 

 

PCR實驗步驟:

①取凍存已裂解的細胞,,室溫放置5分鐘使其*溶解,。

②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。

④RNA清洗 移去上清液,每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,,4℃下7000rpm離心5分鐘,。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度。

MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit 人黑瘤衍生亮拉鏈額外核因子Multi-class antibodies: 48T

 TFAR19/PDCD5 凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體Multi-class antibodies: 0.1ml

Rhesus antibody Rh HN1/ARM2 雄調(diào)節(jié)蛋白2抗體  0.2ml

LH(Mouse luteotropic hormone)ELISA Kit 小鼠促黃體 96T

PRAME 黑色瘤優(yōu)先表達抗原抗體 0.2ml

CDKN2C 細胞周期蛋白依賴性激抑制劑2C抗體 0.2ml

 TFAR19/PDCD5 凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體Multi-class antibodies: 0.1ml

P I NP(Human procollagen I N-terminal peptide) ELISA Kit 人Ⅰ型前膠原N端前肽Multi-class antibodies: 48T

 HSTF2/HSF2 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體Multi-class antibodies: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Matrilin 1 軟骨基質(zhì)蛋白抗體  0.2ml

cPLA2(Human cytosolic phospholipase A2) ELISA Kit 人胞漿型磷脂A2 96T

Rarres3 視黃受體應(yīng)答蛋白3抗體 0.1ml

CXCR7 細胞表面趨化因子受體7抗體 0.1ml

 HSTF2/HSF2 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體Multi-class antibodies: 0.2ml

Rabbit  human sIgA/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

GNG5 G蛋白γ5/Gγ5 抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh AMH/MIS Muellerian繆勒管抑制因子抗體  0.2ml

 JNK1/3 /FITC 熒光標記c-Jun氨基末端激1/3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit  horse IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗馬IgG  0.1ml

 Phospho-SHIP2 (Tyr580)/FITC 熒光標記磷化蛋白酪磷2抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒人纖維蛋白肽A(FPA)elisa檢測試劑盒

人血紅氧化2(HO2)elisa檢測試劑盒

人血清/糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)2(SGK2)elisa檢測試劑盒

人乳脂球表皮生長因子8 (MFG-E8)elisa檢測試劑盒

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa檢測試劑盒

人生長抑受體2(SSTR2)elisa檢測試劑盒

人血小板活因子ib3(PAFAHIB3)elisa檢測試劑盒

人纖維蛋白肽B(FPB)elisa檢測試劑盒

人血管內(nèi)皮抑抗體(ES-Ab)elisa檢測試劑盒

人血紅蛋白C(HbC)elisa檢測試劑盒

人血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR3/Flt4)elisa檢測試劑盒

人嗅4(OLFM4)elisa檢測試劑盒

人肥胖抑制(OB)elisa檢測試劑盒

人性別決定區(qū)Y框蛋白3(SOX3)elisa檢測試劑盒

人蛋白3(PR3)elisa檢測試劑盒


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