產(chǎn)品簡(jiǎn)介
CAS | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
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分子量 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 分子式 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
貨號(hào) | FS-L63763 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 |
—— 銷(xiāo)售熱線 ——
18201748966 |
參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間:2021-02-28 19:14:43瀏覽次數(shù):303
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CAS | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
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分子量 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 分子式 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
貨號(hào) | FS-L63763 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB614 PCR試劑盒 | 50T | FS-L63763 |
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析,。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
綠草定(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-c-Abl (Tyr245) (73E5) Rabbit mAb2-[[(2'-基聯(lián)-基)甲基]氨基]-甲酸酯
雙硫(標(biāo)準(zhǔn)品)5-Methylcytosine (5-mC) (D3S2Z) Rabbit mAb鹽酸度洛西汀
*基化錫(標(biāo)準(zhǔn)品)Syntaxin 6 (C34B2) Rabbit mAb1-溴-2-氟-
氟樂(lè)靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%)Syntaxin 6 (C34B2) Rabbit mAb羧基-酸
殺蟲(chóng)脲(標(biāo)準(zhǔn)品)MEK1/2 (D1A5) Rabbit mAb (PE Conjuga)N'-BOC-L-鳥(niǎo)氨酸;N'-叔丁氧羰基-L-鳥(niǎo)氨酸
異中殺蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)Bcl-2 Antibody (Human Specific)2,6-二氟酮
異中殺蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)Bcl-2 Antibody (Human Specific)2,6-二氟甲酸甲酯
四基錫(標(biāo)準(zhǔn)品)ATM (D2E2) Rabbit mAb5-甲基-2-噻吩甲
戊菌隆(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%)ATM (D2E2) Rabbit mAb1-甲基-1H-咪唑-磺酰
噻螨酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)Phospho-Bcl-2 (Thr56) Antibody (Human Specific)5-甲基喹喔啉
噻螨酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)Phospho-Bcl-2 (Thr56) Antibody (Human Specific)二叔丁基化膦
抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)FE65 Antibody三叔丁基膦
環(huán)草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)CASK Antibody碳酸鎂
2,4,5-涕酸(標(biāo)準(zhǔn)品)LITAF Antibody甲氧基-
西瑪津(標(biāo)準(zhǔn)品)FoxO1 (C29H4) Rabbit mAbBoc-L-羥脯氨酸
西瑪津標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%)FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb[2-(2-氨基-4,7-二氫-氧代-3H-吡咯并[2,3]嘧啶-5-基)基]甲酸
氟蟲(chóng)(標(biāo)準(zhǔn)品)ERp57 (G117) Antibody
五標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%,,基體:)ERp57 (G117) Antibody-氟酸
轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB614 PCR試劑盒TLC法鑒別98%500ml
硝普鈉 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格: 200mg 化自噬相關(guān)蛋白9A抗體 BH4 ELISA Kit 四氫生物蝶呤(BH4)ELISA試劑盒
STE/TNE緩沖液58812376−20°C干燥避光保存L2氨基丁HPLC≥98%醛脫氫酶檢測(cè)試盒20mgS100A11培養(yǎng)基,培養(yǎng)基, 葡萄糖肉浸液肉湯
FUS/TLS ELISA kit半枝蓮
洛匹那韋(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Lopinavir 小鼠骨髓瘤淋巴細(xì)胞英文名稱:N-H
標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 維生素A
TLC法鑒別98%100ml
二十二(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) Docosane 薛瓦酵母 Saccharomyces chevalieri大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)
標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 維生素A醋酯
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一,、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無(wú)到有,,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二,、操作步驟
1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,,不加或添加石蠟油,。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,;
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),,計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體,,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體,。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1,。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性,。
步驟(2)為:待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增,。