詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:綿羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013356
產(chǎn)品規(guī)格: 50次
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一,、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二,、操作步驟 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油,。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min,。 3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測,。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服,、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,,不能混用,;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作,;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測,;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰,、陽性對(duì)照,。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心,。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),,并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置,;不同批號(hào)試劑不能混用,。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None,。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄,。
BMG/ Beta2-MG ELISA Kit 大鼠β2微球蛋白Multi-class antibodies: 48T
Tbx21/T-bet T細(xì)胞介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Tbx21抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Bovine IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml
Cys-C(Mouse Cystatin C) ELISA Kit 小鼠半胱蛋白抑制劑/胱抑C 96T
NAP1L1 核小體組裝蛋白1抗體 0.1ml
BAGE2 /抗原2.2抗體 0.2ml
Tbx21/T-bet T細(xì)胞介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Tbx21抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Beta2-GP1 Ab IgG(Human Beta2-Glycoprotein 1 Antibody IgG) ELISA Kit 人β2糖蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies: 48T
Integrin alpha E/CD103 整合αE抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh LIMS1 整合和生長因子樣蛋白1抗體 0.1ml
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit 人雌誘導(dǎo)蛋白PS2 96T
RAI3 維誘導(dǎo)蛋白3抗體 0.2ml
CK10/Cytokeratin 10 細(xì)胞角蛋白10抗體 0.1ml
Integrin alpha E/CD103 整合αE抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit Monkey IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml
GNG11 G蛋白γ11/Gγ11 抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4 血管生成3/血管生成4抗體 0.1ml
phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 熒光標(biāo)記磷化胰島受體底物-1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.5ml
Sema3A/FITC 熒光標(biāo)記臂板蛋白3A抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
綿羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒人干因子(SCF)elisa檢測試劑盒
人核孔蛋白155kda(NUP155)elisa檢測試劑盒
人蛋白磷(PP)elisa檢測試劑盒
人淀粉樣前體蛋白(APP)elisa檢測試劑盒
人固醇類生成因子1(SF1)elisa檢測試劑盒
人蛋白C-θ(PKCθ)elisa檢測試劑盒
人亮豐富α2糖蛋白1(LRG1)elisa檢測試劑盒
人核孔蛋白85kda(NUP85)elisa檢測試劑盒
人多聚球蛋白受體(PIGR/SC)elisa檢測試劑盒
人多巴受體D5(D5R/DRD5)elisa檢測試劑盒
人衰老關(guān)鍵蛋白5(FBLN5)elisa檢測試劑盒
人谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移θ1(GSTθ1/GSTt1)elisa檢測試劑盒
人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)elisa檢測試劑盒
人蛋白Bγ(PKBG)elisa檢測試劑盒
人蕈型乙酰膽受體亞型M2(M-AChRM2)elisa檢測試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,;空白孔不加,。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板),。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值。