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DNA聚合酶的選擇是聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)中的重要決策之一,，相較于準(zhǔn)確度需求較低的菌落PCR等分析實(shí)驗(yàn),，蛋白表達(dá),、突變檢測,、基因篩選等準(zhǔn)確度要求較高的實(shí)驗(yàn),，則需要選擇高保真DNA聚合酶,，以保證擴(kuò)增過程中的保真度,。什么是DNA聚合酶的保真度DNA聚合酶的保真度指的是其進(jìn)行準(zhǔn)確擴(kuò)增模板的能力，確保DNA序列的高度準(zhǔn)確擴(kuò)增,。高保真酶具有3'到5'核酸外切酶的活性,，可對(duì)聚合反應(yīng)時(shí)錯(cuò)配的堿基進(jìn)行切除，從而保證擴(kuò)增的準(zhǔn)確性,。錯(cuò)配率是高保真DNA聚合酶保真性的一個(gè)通用標(biāo)準(zhǔn),，錯(cuò)配率越低保真性越好。保真度常用錯(cuò)配
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S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,，SAM)是一種重要的中間代謝產(chǎn)物，可作為甲基供體,、丙氨基供體及巰基化合物前體等參與體內(nèi)眾多生化反應(yīng),，例如核酸、蛋白質(zhì)、磷脂質(zhì)和維生素等合成,，也參與半胱氨酸,、谷胱甘肽、多胺以及輔酶A和?；撬岬群蚧衔锏南嗷マD(zhuǎn)化等[1],。SAM是雙手性物質(zhì),有兩種異構(gòu)體:(+)-SAM和(-)-SAM,只有(-)-SAM具有生物活性[2],。SAM的制備方法主要有化學(xué)合成法、酶促合成法、發(fā)酵法等,。在現(xiàn)代生物學(xué)研究中,，SAM也作為mRNA體外合成穩(wěn)定性修飾的
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這才是CRISPR基因編輯實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵點(diǎn),！
這才是CRISPR基因編輯實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵點(diǎn)！導(dǎo)讀2021年8月5日,，美國加州大學(xué)伯克利分校的JenniferDoudna團(tuán)隊(duì)在NatureChemicalBilology發(fā)文稱開發(fā)了一種基于CRISPR的核酸檢測新技術(shù)來檢測xinguan,，最快20min完成檢測，較于傳統(tǒng)的RT-qPCR檢測方法更快速,，這是CRISPR在病毒檢測領(lǐng)域應(yīng)用的又一大進(jìn)步,。CRISPR(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)即成簇規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序 -
一鍵收藏：讓DNA甲基化觸手可得！PartⅠ何為DNA甲基化,？DNA甲基化（DNAmethylation）是一種重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記,。是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMT）催化下，以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體,，將活性甲基轉(zhuǎn)移至DNA鏈中特定堿基上的化學(xué)修飾過程,。DNA甲基化與基因的調(diào)控表達(dá)，染色質(zhì)結(jié)構(gòu),，基因印記，X染色體失活,，衰老人類腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用,。圖1.DNA甲基化的形成（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）PartⅡDNA甲基化功能基因表達(dá)調(diào)控生物體內(nèi)，DNA復(fù)制后胞嘧啶的甲基化會(huì)改變DNA的構(gòu)象,，使DN
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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)——更簡便、更靈敏,、更準(zhǔn)確自1990年螢光素酶生物傳感器技術(shù)誕生,，時(shí)至今日，螢光素酶報(bào)告基因的檢測系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞信號(hào)通路,、siRNA/miRNA,、免疫應(yīng)答,、藥物篩選等研究。螢光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)中具有代表性的是螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因和海腎螢光素酶報(bào)告基因,，由于兩種酶底物和發(fā)光顏色的區(qū)別,，且在動(dòng)物體內(nèi)無內(nèi)源性表達(dá)，使其在單,、雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用,。檢測原理螢火蟲螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，大小為61KDa,。在氧氣,、ATP和鎂離子同時(shí)存在的條件下，催化底物螢火蟲螢光素
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CUT&Tag測評(píng) | 蓄勢已發(fā)的技術(shù)風(fēng)潮
CUT&Tag（CleavageUnderTargetsａndTagment）作為一種新興的DNA蛋白互作研究技術(shù),，憑借其信噪比高,，可重復(fù)性好，實(shí)驗(yàn)周期更快等優(yōu)勢,，在植物以及動(dòng)物細(xì)胞中的成功應(yīng)用與科研文章的發(fā)表[1-2],，受到廣大科研工作者的信賴。CUT&Tag是蛋白質(zhì)與DNA互作研究的革新技術(shù),，其核心技術(shù)為pA/G-Tn5Transposase,，將ProteinA/G與Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合，使得與抗體結(jié)合的同時(shí),，Tn5切割核小體上纏繞的DNA片段,，獲得目的序列并完成文庫構(gòu)建，實(shí)現(xiàn)：上班拿到細(xì)胞 -
手把手教你做出RT-qPCR最美曲線系列：1.1提取高品質(zhì)RNA
手把手教你做出RT-qPCR最美曲線系列：1.1提取高品質(zhì)RNARNA提取是RT-qPCR實(shí)驗(yàn)成功的首要步驟,，RNA的質(zhì)量直接關(guān)乎RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,。但是在實(shí)驗(yàn)過程中我們經(jīng)常會(huì)碰到RNA提取實(shí)驗(yàn)翻車的情況，主要是因?yàn)镽NA的分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定和無處不在的RNase對(duì)RNA的降解造成的,。由此可見,，想要提取到高質(zhì)量的RNA并非易事。今天,，小翌主要從樣本選擇,、樣本采集與保存、RNA提取這三個(gè)方面來闡述RNA提取過程需注意的關(guān)鍵要點(diǎn),，以輔助后續(xù)的qPCR實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行,。樣本的選擇樣本最好選擇處于生長旺盛 -
快速PCR預(yù)混液,，滿足您的多種擴(kuò)增需求——提升PCR成功率，大幅減少擴(kuò)增時(shí)間你還在擔(dān)心PCR擴(kuò)增檢出率低嗎？你還在擔(dān)心PCR擴(kuò)增產(chǎn)量低嗎,？你還在擔(dān)心PCR擴(kuò)增時(shí)間長嗎,？翌圣Hieff®RobustPCRMasterMix是一款高檢出率型PCR預(yù)混液，通過酶結(jié)構(gòu)的改造,、篩選及Buffer的優(yōu)化,，決了常規(guī)PCRMix檢出率低、產(chǎn)量低的問題,。另外,，延伸速度提升至15-30s/kb，可用于基因的快速克隆,。產(chǎn)品特點(diǎn)◎擴(kuò)增速度達(dá)15-30s/kb,，極限速度5s/kb◎擴(kuò)增長度1-4kb◎模板適用性廣◎靶基因
