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                      ——更簡(jiǎn)便、更靈敏,、更準(zhǔn)確

自1990年螢光素酶生物傳感器技術(shù)誕生,，時(shí)至今日，螢光素酶報(bào)告基因的檢測(cè)系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞信號(hào)通路,、siRNA/miRNA,、免疫應(yīng)答、藥物篩選等研究,。螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)中具有代表性的是螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因和海腎螢光素酶報(bào)告基因,，由于兩種酶底物和發(fā)光顏色的區(qū)別，且在動(dòng)物體內(nèi)無(wú)內(nèi)源性表達(dá),，使其在單,、雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用,。

螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，大小為61KDa,。在氧氣,、ATP和鎂離子同時(shí)存在的條件下，催化底物螢火蟲(chóng)螢光素氧化,，生成氧化螢光素,，并發(fā)出黃綠色光，其*發(fā)光波長(zhǎng)為560nm,。

海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白,，大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素,，氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide,，并發(fā)出藍(lán)光，其*發(fā)光波長(zhǎng)為465nm,。

對(duì)于螢光素酶的化學(xué)發(fā)光與檢測(cè)模式上存在以下差異：

? 化學(xué)發(fā)光根據(jù)發(fā)光的形式和種類分為閃光型（flash-type）與輝光型（glow-type）兩種類型,；

? 在檢測(cè)方法上分為非均質(zhì)檢測(cè)與均質(zhì)檢測(cè)；

那么在螢光素酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中如何進(jìn)行報(bào)告基因檢測(cè)試劑的選擇呢,？接下來(lái)讓我們一探究竟~

1 閃光型與輝光型差異

2 非均質(zhì)型與均質(zhì)型差異

? 非均質(zhì)型

優(yōu)勢(shì)：可留樣檢測(cè)（裂解液可保存用于后續(xù)檢測(cè)）,；劣勢(shì)：操作繁瑣。

? 均質(zhì)型

優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)單（裂解檢測(cè)僅需一步）,；劣勢(shì)：不可留樣檢測(cè),。

好啦,！以上說(shuō)了這么多,，相信大家已經(jīng)明確了自己的需求啦~

翌圣生物提供“非均質(zhì)法閃光型"和“均質(zhì)法輝光型" 螢光素酶檢測(cè)試劑,，大家可以根據(jù)單、雙螢光素酶報(bào)告基因進(jìn)行選擇~

1 非均質(zhì)閃光型報(bào)告基因檢測(cè)（貨號(hào)：11401,、11402）

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

裂解能力更強(qiáng)：能夠*裂解絕大部分種類細(xì)胞,。

信號(hào)更強(qiáng)：能夠精準(zhǔn)檢測(cè)弱啟動(dòng)子的表達(dá)。

靈敏度更高：可檢測(cè)低至10‐20摩爾螢光素酶分子,。

線性范圍更廣：線性檢測(cè)范圍超過(guò)酶濃度的8個(gè)數(shù)量級(jí),。

? 應(yīng)用方向

精準(zhǔn)測(cè)量轉(zhuǎn)錄調(diào)控，miRNA靶基因驗(yàn)證,，信號(hào)通路,，轉(zhuǎn)錄因子和啟動(dòng)子研究等。

? 適用樣本

哺乳動(dòng)物細(xì)胞,、原生質(zhì)體,、煙草葉片

? 數(shù)據(jù)展示

 

熒光強(qiáng)度媲美進(jìn)口品牌

圖1. Yeasen（貨號(hào)：11402）熒光強(qiáng)度與P品牌相當(dāng),，可替換進(jìn)口品牌。

信號(hào)檢測(cè)更強(qiáng),，淬滅*

圖2. Yeasen（貨號(hào)：11402）檢測(cè)試劑和螢光素酶相互作用,，可獲得最佳的發(fā)光強(qiáng)度，加入海腎螢光素酶底物后,，螢火蟲(chóng)螢光素發(fā)光淬滅情況：基本能夠*淬滅,。

2 均質(zhì)型輝光型報(bào)告基因檢測(cè)（貨號(hào)：11404、11405）

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

信號(hào)穩(wěn)定：半衰期長(zhǎng)（達(dá)2h）,，非常適用于高通量檢測(cè),，再也不用擔(dān)心螢光信號(hào)淬滅的問(wèn)題。

操作簡(jiǎn)便：只需要加樣-讀值,，即可完成實(shí)驗(yàn),，擠出更多時(shí)間發(fā)paper。

準(zhǔn)確度高：我有海腎螢光素酶的底物——腔腸素,，可校正孔間細(xì)胞數(shù)量,、轉(zhuǎn)染效率的誤差。

兼容性好：可用于多種常用細(xì)胞培養(yǎng)液,，如RPMI 1640,、DMEM 、MEM-α,、F12,、DMEM/F12等。

無(wú)刺激性氣味：還你一個(gè)清新愉快的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,。

? 應(yīng)用方向

Fc effector檢測(cè)系統(tǒng),，信號(hào)通路，免疫檢查點(diǎn)檢測(cè)系統(tǒng)( immune checkpoint assays),，細(xì)胞因子,、生長(zhǎng)因子檢測(cè)和抗體內(nèi)化研究的檢測(cè)系統(tǒng)等。

? 適用樣本

哺乳動(dòng)物細(xì)胞,、原生質(zhì)體

? 數(shù)據(jù)展示

熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性媲美進(jìn)口品牌

圖3. Yeasen（貨號(hào)：11405）熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性與P進(jìn)口品牌相當(dāng),。

淬滅效果與進(jìn)口品牌相當(dāng)

圖4. Yeasen（貨號(hào)：11405）檢測(cè)試劑和螢光素酶相互作用，可獲得最佳的發(fā)光強(qiáng)度,，加入海腎螢光素酶底物后,，螢火蟲(chóng)螢光素發(fā)光淬滅情況，淬滅效果與P進(jìn)口品牌相當(dāng),。

在不同培養(yǎng)基上能正常發(fā)光,，且發(fā)光效果差異小于P進(jìn)口公司

圖5. Yeasen（貨號(hào)：11405）在常用培養(yǎng)基：DMEM、F12,、MEMα,、RPMI-1640中都可以正常發(fā)光,，并且不同培養(yǎng)基中的發(fā)光效果差異小于P進(jìn)口公司。,。

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Q1：雙螢光素酶報(bào)告基因最適反應(yīng)溫度,？

A：室溫（20-22℃）。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物,，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫,。此兩種螢光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響的，為了保證實(shí)驗(yàn)的一致性,，我們推薦此兩種工作液在檢測(cè)時(shí)都孵育至室溫,。

Q2：雙螢光素酶報(bào)告基因載體該如何選擇？

A：1）螢火蟲(chóng)螢光素酶建議選取pGL-3或pGL-4或者自己構(gòu)建的載體,。,。

  2）海腎螢光素酶建議選取pRL-TK或pGL-4載體或者自己構(gòu)建相應(yīng)的載體。建議優(yōu)先選用中等強(qiáng)度的啟動(dòng)子（如TK）,，而不使用強(qiáng)啟動(dòng)子（如SV40,、CMV），以免影響主報(bào)告基因的表達(dá),，或進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索選擇合適的載體,。

Q3：檢測(cè)的熒光數(shù)值很低怎么辦？

A：檢測(cè)的熒光數(shù)值很低說(shuō)明細(xì)胞裂解液中的螢光素酶含量很低,。通常解決辦法為

1）轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染級(jí)別的質(zhì)粒抽提試劑盒抽提,。

2）優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，盡可能的提高轉(zhuǎn)染效率,。

3）增加實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞量,，并且裂解細(xì)胞時(shí)，適當(dāng)減少細(xì)胞裂解液的量,。

Q4：進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中,，熒光信號(hào)值太高該如何進(jìn)行調(diào)整？

A：

1）在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)后,，減少細(xì)胞的孵育時(shí)間,。

2）降低熒光信號(hào)采集時(shí)間。

3）進(jìn)行樣品的稀釋,。

Q5：螢火蟲(chóng)螢光素酶讀值和海腎螢光素酶讀值的比例多少時(shí)比較合適？

A：盡量保證對(duì)照組的螢火蟲(chóng)螢光素酶的讀值和海腎螢光素酶的讀值接近,，或者海腎螢光素酶的讀值比螢火蟲(chóng)螢光素酶的讀值稍高,。對(duì)于具體的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，由于螢火蟲(chóng)螢光素酶質(zhì)粒和海腎螢光素酶的質(zhì)粒抽提的質(zhì)量不一致,，待檢測(cè)目的調(diào)控元件的調(diào)控能力的不同等原因,，一次實(shí)驗(yàn)很難達(dá)到一個(gè)比較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，因此對(duì)于此實(shí)驗(yàn)，我們推薦預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化螢火蟲(chóng)螢光素酶質(zhì)粒和海腎螢光素酶質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染量,。

Q6：細(xì)胞培養(yǎng),、轉(zhuǎn)染時(shí)使用96孔板還是6孔板或者其他規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng)板？

A：一般來(lái)說(shuō),，如果能保證10%的轉(zhuǎn)染效率,，96孔板的細(xì)胞量就能夠達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。如果細(xì)胞很難轉(zhuǎn)染或者待檢測(cè)的調(diào)控原件的調(diào)控作用很弱,，可以增加實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞量,。

Q7：此試劑盒采用何種儀器和檢測(cè)板檢測(cè)比較好？

A：檢測(cè)儀器：能檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器都適用,，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同,，測(cè)得的光信號(hào)值也會(huì)不同；檢測(cè)板：為防止孔間干擾,，推薦使用不透光白色酶標(biāo)板,。黑色酶標(biāo)板也可用，但因黑色會(huì)吸收光信號(hào),，可能會(huì)降低信號(hào),。 

HB210811