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1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,,封閉模具邊緣,架好梳子;
2. 根據(jù)欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準確稱量瓊脂糖干粉,,加入到配膠用的三角燒瓶內,定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml) ,;
3. 放入到微波爐內加熱熔化,。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,,輕輕旋轉以充分 混勻凝膠溶液,,倒入電泳槽中,待其凝固,;
4. 室溫下 30~ 45 分鐘后凝膠*凝結,, 小心拔出梳子, 將凝膠安放在電泳內槽,;
5. 向電泳槽中倒入電泳緩沖液,,其量以沒過膠面 1mm 為宜,如樣品孔內有氣 泡,,應設法除去,;
6. 在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液(loading buffer) ,混勻后,,用槍 將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內,;
7. 接通電源,紅色為正極,,黑色為負極,,切記DNA 樣品由負極往正極泳動 ( 靠近加樣孔的一端為負) 。一般 60~100V 電壓,,電泳 20~40min 即可,;
8. 根據(jù)指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳,;
9. 電泳完畢,,關上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,,并與核酸分子 量標準 Marker 比較被擴增產物的大小,。
瓊脂糖凝膠濃度與線形 DNA的*分辨范圍
瓊脂糖凝膠濃度 | 線形 DNA的*分辨范圍(bp) |
---|---|
0.5% | 1,000~30,000 |
0.7% | 800~12,000 |
1.0% | 500~10,000 |
1.2% | 400~7,000 |
1.5% | 200~3,000 |
2.0% | 50~2,000 |