聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級會員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機(jī)：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
- 個性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
標(biāo)簽： 大鼠 肝星狀細(xì)胞 原代培養(yǎng)
大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）用于細(xì)胞保種；（2）用于分子生物學(xué)研究,；（3）用于基因治療研究,。
實驗方法
- 胰酶消化法
| 實驗方法原理 | 將小鼠的肝細(xì)胞從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰酶,、螯合劑（常用EDTA）處理,，分散成單細(xì)胞,，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖,。 |
|---|---|
| 實驗材料 | SD大鼠 |
| 試劑,、試劑盒 | 戊巴比妥鈉 小牛血清 DMEM 酶消化液 D-Hanks' 液 酚紅 臺盼蘭 HBSS 氯化鈉 PBS |
| 儀器、耗材 | 手術(shù)刀 手術(shù)剪 尼龍網(wǎng) 相差顯微鏡 熒光顯微鏡 |
| 實驗步驟 | 一,、實驗材料準(zhǔn)備 2. 試劑：戊巴比妥鈉,，小牛血清(或胎牛血清，則更好),，DMEM,，酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配),，18% Nycodenz(以GBSS配),，D-Hanks' 液(KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L,，NaCl 8.0 g/L,，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L,，可加酚紅 0.02 g/L),，HBSS，臺盼蘭等,。 3. 器械：手術(shù)器械,，200目尼龍網(wǎng)，相差顯微鏡,，熒光顯微鏡,。 二、原代培養(yǎng)方法 1. 大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹,，進(jìn)行門靜脈插管,，以D-Hanks'液灌注，同時剪開下腔靜脈,，沖掉血液后,，改灌以100 ml酶消化液I(0.05% IV型膠原酶)。 三,、傳代方法 四,、 結(jié)果 接種次日,，光鏡下可見細(xì)胞呈星芒狀，胞質(zhì)內(nèi)有脂滴,，熒光鏡下328 nm處見自發(fā)熒光,。附上發(fā)表于Biochem Biophys Res Commun 2004年文章的照片(圖1)。
|
| 注意事項 | 1. 進(jìn)一步鑒別需要做免疫組化：Desmin和α-SMA,；后者在細(xì)胞激活后才表達(dá),。 |
| 其他 | 一,、參考文獻(xiàn) 1. 袁桃霞,，張錦生，張月娥,，等. 大鼠肝Ito細(xì)胞的體外培養(yǎng)及肝素對其抑制作用的觀察. 上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 1996;23(2):90-93. 2. Huang GC, Zhang JS, Tang . Involvement of C/EBP-α gene in in vitro activation of rat hepatic slate cells. Biochem Biophys Res Commun 2004;324(4):1309-1318. |
