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標(biāo)簽： 腫瘤 細(xì)胞 原代培養(yǎng)
腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）研究癌變機理,；（2）研究抗癌藥檢測,；（3）研究癌分子生物學(xué)；（4）用于闡明和解決癌癥。
詳細(xì)
實驗方法
- 組織塊法
- 酶消化法
- 脫落細(xì)胞法
| 實驗方法原理 | 腫瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)與正常細(xì)胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似,。一般常用原代細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，10%血清濃度即可,，在原代培養(yǎng)時需加入原代細(xì)胞培養(yǎng)的特制添加物,，或原患者血清（1%-2%）以利細(xì)胞生長。用細(xì)胞生長因子如胰島素,、松,、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng),。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長因子,。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 瘤組織 |
| 試劑、試劑盒 | Hanks液 |
| 儀器,、耗材 | 平皿 培養(yǎng)瓶 恒溫箱 |
| 實驗步驟 | 一,、將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分,。 |
| 其他 | 一、對腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株的評價 已建成的各種腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株,，無疑都是可用的實驗對象,。近年我國已建成的腫瘤細(xì)胞系已非常多，并獲得越來越廣泛的應(yīng)用,。但根據(jù)研究者的經(jīng)驗,，在使用這些細(xì)胞系時，應(yīng)持特別審慎態(tài)度,，主要是應(yīng)考慮到這些細(xì)胞在長期傳代中有否發(fā)生遺傳性改變的可能,。*，長期傳代細(xì)胞系染色體核型常是不穩(wěn)定的,。另外也可能發(fā)生如基因突變,、基因易位或缺失等變化。其結(jié)果可能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)性狀上的變動,。 以近年建成的各種腫瘤細(xì)胞系為例,，都已傳代少則幾十，多則百代以上后,，才確認(rèn)建成了細(xì)胞系,。這種情況下很難保證細(xì)胞從初代到建成時的性狀仍是一致的。已如前述,，癌細(xì)胞在培養(yǎng)中并非能很順利地傳下去,，凡已長期傳代的細(xì)胞系，都已獲得不死性,。當(dāng)前尚未*確證所有癌細(xì)胞都具有不死性,；因此尚難肯定在長期培養(yǎng)中的癌細(xì)胞的生物學(xué)性狀與體內(nèi)時仍*相同（包括不死性）。據(jù)上述對用癌細(xì)胞系所獲實驗結(jié)果應(yīng)盡量做分析性的結(jié)論,，避免做概括性的與體內(nèi)等同的結(jié)論,，外推與體內(nèi)等同更是不妥的。廣泛來說,，應(yīng)用各種較長時間培養(yǎng)細(xì)胞做實驗時,，都應(yīng)如此。 根據(jù)人們的經(jīng)驗,，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng),，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。當(dāng)腫瘤組織或細(xì)胞初代接種培養(yǎng)后,，常出現(xiàn)以下幾種情況： 1. *無細(xì)胞游出或移動,； 2. 有細(xì)胞移動和游出，但無細(xì)胞增殖,，細(xì)胞長時間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代,； 3. 有細(xì)胞增殖，傳若干代后停止生長或衰退死亡,； 4. 傳數(shù)代后細(xì)胞增殖緩慢，經(jīng)過一段停滯期后,，才又呈旺盛生長狀態(tài),，形成穩(wěn)定生長的腫瘤傳代細(xì)胞系。 以上現(xiàn)象說明腫瘤細(xì)胞對體外生存條件有較高的要求,，并需經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長,，因此欲獲得好的培養(yǎng)效果，不能局限于一般培養(yǎng)法,，必須采用一些特殊的措施,。 1. 適宜底物 把經(jīng)過純化的細(xì)胞接種在不同的底物上，如鼠尾膠原底層,、飼細(xì)胞層等,。 2. 生長因子 應(yīng)用促細(xì)胞生長因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長因子,。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促生長物,，常用有胰島素、,、雌激素以及其它生長因子,。 為提高腫瘤細(xì)胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞（干細(xì)胞）的數(shù)量，可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后,，再從動物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng),，能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動物以裸鼠,。 3,、動物體媒介培養(yǎng)方法 （1）瘤塊接種：取新鮮瘤組織，用 Hanks液洗凈血污,，切成 1～3毫米小塊,，用穿刺針頭吸一小瘤塊，用酒精棉球擦拭動物腹部后,，直接刺入皮下,，注入瘤塊,。 （2）飼養(yǎng)觀察，待腫瘤生長達(dá)較大體積后,，剝?nèi)〕隽鼋M織,。 （3）進(jìn)行體外培養(yǎng)。 （4）為防止失敗,，仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代,。通過裸鼠媒介接種，有活力的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增多,，細(xì)胞培養(yǎng)易于成功,。
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