日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

上海北諾生物科技有限公司

中級會員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > 細(xì)胞技術(shù)專題:大鼠乳鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)實驗
中級會員·14年
聯(lián)人:
周經(jīng)理 劉經(jīng)理
話:
021-57730393
機:
15800960770
真:
86-021-61496710
址:
上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
化:
www.bnbiotech.com
網(wǎng)址:
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機商鋪

細(xì)胞技術(shù)專題:大鼠乳鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)實驗

2014-2-20  閱讀(1075)

分享:

標(biāo)簽: 大鼠 乳鼠 成骨細(xì)胞

大鼠乳鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)可以:(1)獲得大鼠乳鼠成骨細(xì)胞,;(2)用于骨修復(fù)的細(xì)胞學(xué)機制研究,。

實驗方法

  • 酶消化法
實驗方法原理取材于出生2~3 d 小鼠顱骨,以含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),,采用膠原酶消化法分離成骨細(xì)胞,,并進(jìn)行細(xì)胞接種與傳代。采用膠原酶消化法分離培養(yǎng)成骨細(xì)胞是一種可靠,、簡便,、快速的細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法。
實驗材料

SD大鼠

試劑,、試劑盒

F12 *培養(yǎng)液 胰蛋白酶 Ⅱ型膠原酶 酒精

儀器,、耗材

手術(shù)器械 磁力攪拌器

實驗步驟一、實驗步驟


1.  拉頸處死24 小時內(nèi)新生的SD大鼠,75%乙醇浸泡5 min,,取出頭蓋骨,,分離頂骨和額骨,冰生理鹽水液反復(fù)洗滌大鼠乳鼠顱蓋骨標(biāo)本除去脂肪組織及殘留血,,放入另一盛有F12 *培基液的培養(yǎng)皿中再洗滌,, 將顱骨剪成2~5 mm碎片,將洗滌過的骨碎片用 0.25%胰蛋白酶2 ml 預(yù)消化15 min,,以清除纖維組織細(xì)胞,,棄去上清液(其中主要含成纖維細(xì)胞)。


2.  然后以0.1%  Ⅱ型膠原酶10 ml,,在37℃環(huán)境中消化 20 分鐘,,室溫下磁力攪拌消化20 分鐘。靜置數(shù)分鐘,,收集消化液,,室溫下以1200 rpm離心10 分鐘。去除上清液,,用20% 胎牛血清的F12 培養(yǎng)液4 ml 懸 浮細(xì)胞,,接種于75 ml 培養(yǎng)瓶中,補培養(yǎng)液8 ml 使每瓶液體量達(dá)到12 ml,;對靜置后沉淀部分可再重復(fù)以膠原酶消化20 分鐘,、磁力攪拌消化15 分鐘、離心10 分鐘,,將獲得的3 瓶細(xì)胞放置于二氧化碳培養(yǎng)箱,,在5% CO2,95%空氣,,37℃溫度下培養(yǎng),,24 小時后可見細(xì)胞貼壁生長,胞質(zhì)開始伸展,,換新鮮培養(yǎng)液,,以后每隔48 小時換培養(yǎng)液(注:消化視具體情況而定,也可多消化 1 遍),。


3.  原代培養(yǎng)一般接種后第7 天能長滿,。傳代時,取生長良好,、貼壁松緊適度的成骨細(xì)胞 1 瓶,,棄去培養(yǎng) 液,傳代時先以 PBS 沖洗 2 遍,,加 0.25%胰酶1 ml,,室溫下消化3~5 分鐘,,將胰蛋白酶液棄去,加 F12 培養(yǎng)液充分吹打8-10 分鐘,。將已消化的細(xì)胞收集,、合并,計數(shù),;用 F12 *培基調(diào)節(jié)至細(xì)胞濃度為合適濃 度,。一般取2-5 代成骨細(xì)胞進(jìn)行實驗,。代數(shù)太多,,細(xì)胞老化或者分化明顯。
 

二,、結(jié)果

如圖所示,,成骨細(xì)胞的形狀和成纖維細(xì)胞非常相似,但是不同的是,,比成纖維細(xì)胞更不容易消化,,尤 其是傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化的時候,,非常難消化,,并且不易消化成單個細(xì)胞。
 

圖1:成骨細(xì)胞

圖2:成骨細(xì)胞100倍
 

 
圖3:成骨細(xì)胞形成的礦化結(jié)節(jié)

三,、鑒定的方法

1.  堿性磷酸酶(ALP)活性檢測

2.  骨玻璃樣蛋白(BGP)檢測

3.  礦化結(jié)節(jié)檢測

收起 
其他一,、討論
 

成骨細(xì)胞包繞在硬組織中,致使處理困難,,可采用骨組織塊法,、酶消化法、骨膜組織塊法,、 骨髓培養(yǎng)法以及薄層骨片經(jīng) EDTA 處理并經(jīng)膠原酶消化,,均可培養(yǎng)出成骨細(xì)胞。體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞保持 有骨組織細(xì)胞的某些特征,。據(jù)文獻(xiàn)報道,,不同方法培養(yǎng)的成骨細(xì)胞形態(tài)是不同的[1]

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏,!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
產(chǎn)品對比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言