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標(biāo)簽： 光學(xué)顯微鏡 檢測(cè) 腫瘤 細(xì)胞形態(tài)
光學(xué)顯微鏡檢測(cè)腫瘤細(xì)胞形態(tài)可以：（1）輔助判斷腫瘤細(xì)胞是否凋亡,；（2）用于病理檢查；（3）提取腫瘤細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)信息,。
詳細(xì)
實(shí)驗(yàn)方法
- 瑞氏-吉姆薩混染法
- HE染色法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 吉姆薩染液由天青,，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同,。
1）嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),，與酸性染料伊紅結(jié)果,，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì),； 2）細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,，染紫藍(lán)色,，稱為嗜堿性物質(zhì)； 3）中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,，染淡紫色,，稱為中性物質(zhì)。
PH對(duì)細(xì)胞染色有影響,。細(xì)胞各種成分均分布蛋白質(zhì),，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定,，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多,，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅,；在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色 偏藍(lán),。因此細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感,，染色用玻片必須清潔，無(wú)酸堿污染,。配制必須用甲醇,，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性,，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常,，以致識(shí)別困難，甚至造成錯(cuò)誤,。
用途：適合大多數(shù)細(xì)胞組織的染色,，包括血涂片、各種組織石蠟切片,、冰凍切片,、以及各種培養(yǎng)細(xì)胞。染色體顯帶,、多種微生物的鑒別染色和細(xì)胞凋亡的檢測(cè)等,。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 腫瘤細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 | 甲醛 二甲苯 Gimsa染液 Sorensen磷酸緩沖液 香柏油 蒸餾水 |
| 儀器,、耗材 | 光學(xué)顯微鏡 樹膠 載玻片 蓋玻片 洗瓶 離心機(jī) 離心管 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一,、試劑配制
1. 瑞氏染液配制
稱瑞氏染料0.1 g于研缽，少量多次加入AR級(jí)甲醇至*溶解，后補(bǔ)充至60 ml棕色瓶密封保存,，可加3 ml甘油防止揮發(fā),。
2. 吉姆薩染液配制
0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶?jī)?nèi)，56度,，水浴90-120 min,，當(dāng)染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇，充分搖勻后過(guò)濾,，棕色瓶室溫可保存一周,。
二、染色
3. 液化精液2 000/ rmin 離心10 min，等滲鹽水洗3遍,，涂片后自然干燥,。
4. 臨用前，瑞,、吉染液按10：1混合,，染色30-60 s。
5. 加等量PBS（pH6.9）,，再染10 min,。
6. 自來(lái)水沖洗，自然干燥后,，即可鏡檢,，也可直接香柏油兼做透明與封片。 |
