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標(biāo)簽： 小鼠 肝細(xì)胞 原代培養(yǎng)
小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）用于細(xì)胞保種,；（2）用于分子生物學(xué)研究；（3）用于基因治療研究,。
實驗方法
- 胰酶消化法
| 實驗方法原理 | 將小鼠的肝細(xì)胞從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰酶,、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞,，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存,、生長和繁殖,。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 小鼠 |
| 試劑、試劑盒 | DMEM 無血清DMEM培養(yǎng)基 胰酶 PBS |
| 儀器,、耗材 | 飯盒 紗布 剪子 鑷子 燒杯 平皿 研磨玻片 濾網(wǎng) 離心管 6孔培養(yǎng)板 吸管 移液管 手套 微量加樣器 |
| 實驗步驟 | 一,、實驗材料準(zhǔn)備 1. 動物：小鼠。 2. 試劑：DMEM(含血清),、無血清DMEM培養(yǎng)基,、胰酶、PBS,。 3. 器械：飯盒,、紗布、小剪子,、小鑷子,、大鑷子、大燒杯,、平皿,、研磨玻片、濾網(wǎng),、離心管(15/50 ml),、6孔培養(yǎng)板、吸管,、移液管,、手套、微量加樣器,。 4. 準(zhǔn)備：酒精擦拭臺面后把物品擺放好,，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風(fēng)機(jī)吹至實驗結(jié)束,。 二、方法 1. 將小鼠斷頸致死,，置75%酒精泡2-3秒鐘,，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中,。 2. 剔除脂肪,、結(jié)締組織、血液等雜物,，轉(zhuǎn)移到另一個盛有PBS液的平皿中,。 2.3 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約1mm2)，玻片研磨,，轉(zhuǎn)到離心管,，離心(1 000 rpm，5 min),。 4. 視組織或細(xì)胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶,，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次,，或用吸管吹打一次,，使細(xì)胞分離。 5. 加入3-5 ml含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用,。 6. 用100目孔徑濾網(wǎng)濾過,，除去未消化的大組織塊。 7. 再次離心5 min,，棄上清液,。 8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml，沖散細(xì)胞,，再離心一次,，棄上清液。 9. 加入含血清的培養(yǎng)液1-2 ml(視細(xì)胞量),，血球計數(shù)板計數(shù),。 10. 將細(xì)胞調(diào)整到5×105/ml左右，轉(zhuǎn)移至6孔培養(yǎng)板中,，37℃下培養(yǎng) |
