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標簽： 小鼠 肝細胞 原代培養(yǎng)
小鼠肝細胞原代培養(yǎng)可以：（1）用于細胞保種,；（2）用于分子生物學(xué)研究,；（3）用于基因治療研究,。
實驗方法
- 胰酶消化法
| 實驗方法原理 | 將小鼠的肝細胞從機體中取出,，經(jīng)胰酶,、螯合劑（常用EDTA）處理,，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細胞得以生存,、生長和繁殖。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 小鼠 |
| 試劑,、試劑盒 | DMEM 無血清DMEM培養(yǎng)基 胰酶 PBS |
| 儀器,、耗材 | 飯盒 紗布 剪子 鑷子 燒杯 平皿 研磨玻片 濾網(wǎng) 離心管 6孔培養(yǎng)板 吸管 移液管 手套 微量加樣器 |
| 實驗步驟 | 一、實驗材料準備 1. 動物：小鼠,。 2. 試劑：DMEM(含血清),、無血清DMEM培養(yǎng)基、胰酶,、PBS,。 3. 器械：飯盒,、紗布,、小剪子、小鑷子,、大鑷子,、大燒杯、平皿,、研磨玻片,、濾網(wǎng)、離心管(15/50 ml),、6孔培養(yǎng)板,、吸管、移液管,、手套,、微量加樣器。 4. 準備：酒精擦拭臺面后把物品擺放好,，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風(fēng)機吹至實驗結(jié)束,。 二,、方法 1. 將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘,，取肝臟,，置于盛有PBS的平皿中。 2. 剔除脂肪,、結(jié)締組織,、血液等雜物，轉(zhuǎn)移到另一個盛有PBS液的平皿中,。 2.3 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約1mm2),，玻片研磨，轉(zhuǎn)到離心管,，離心(1 000 rpm,，5 min)。 4. 視組織或細胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶,，37℃中消化20分鐘,，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次,，使細胞分離,。 5. 加入3-5 ml含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。 6. 用100目孔徑濾網(wǎng)濾過,，除去未消化的大組織塊,。 7. 再次離心5 min，棄上清液,。 8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml,，沖散細胞，再離心一次,，棄上清液,。 9. 加入含血清的培養(yǎng)液1-2 ml(視細胞量)，血球計數(shù)板計數(shù),。 10. 將細胞調(diào)整到5×105/ml左右,，轉(zhuǎn)移至6孔培養(yǎng)板中，37℃下培養(yǎng) |
