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生物化學(xué)技術(shù)專題:蘆丁的提取及鑒定

2014-1-9  閱讀(1685)

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概述

蘆?。≧utin)廣泛存在于植物界中,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含蘆丁的植物至少在70種以上,如煙葉,、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有,。尤以槐花米(為植物Sophorajaponica的未開放的花蕾)和蕎麥中含量zui高,,可作為大量提取蘆丁的原料。蘆丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羥基與蕓香糖(Rutinose)〔為葡萄糖(Glucose)與鼠李糖(Rhamnose)組成的雙糖〕脫水合成的苷,。

 

蘆丁為淺黃色粉末或極細的針狀結(jié)晶,,含有三分子的結(jié)晶水,熔點為174~178℃,,無水物188~190℃,。溶解度:冷水中為1:10000;熱水中1:200,;冷乙醇1:650,;熱乙醇1:60;冷吡啶1:12,。微溶于丙酮,、乙酸乙酯,,不溶于苯、,、氯仿,、石油醚,溶于堿而呈黃色,。

 

 蘆丁具有維生素P樣作用,。有助于保持及恢復(fù)毛細血管的正常彈性,主要用作防治高血壓病的輔助治療劑,,亦可用于防治因缺乏蘆丁所致的其他出血癥,。


實驗?zāi)康暮鸵?/strong>

1.實驗?zāi)康?/p>

    ①通過蘆丁的提取與精制掌握堿-酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。

    ②通過蘆丁結(jié)構(gòu)的檢識,,了解苷類結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法,。

    ③了解UV及NMR在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用。


2.要求

    ①要拿到以下三個化合物:蘆丁,、槲皮素,、蘆丁的全乙酰化合物,。

    ②能夠拿根據(jù)化學(xué)試驗及UV,、NMR數(shù)據(jù)初步推斷出蘆丁的結(jié)構(gòu)。并對黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)測定有一般性的了解,。


試驗方法
1.蘆丁的提取與分離(見下圖)

 2.蘆丁的鑒定

    1)蘆丁的定性反應(yīng)

    取蘆丁3~4mg,,加乙醇5~6ml使其溶解,分成三份作下述試驗:

    A.取上述溶液1~2ml,,加2滴濃鹽酸,,在酌加少許鎂粉,注意觀察顏色變化情況,。

    B.取上述溶液1~2ml,,然后滴加2%檸檬酸的甲醇溶液,注意觀察顏色變化情況,,在繼續(xù)向試管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液,,并詳細記錄顏色變化情況。

    C.取上述溶液1~2ml,,然后再加入10%α-等體積的萘酚乙醇溶液,,搖勻,沿管壁滴加濃硫酸,,注意觀察兩液面產(chǎn)生的顏色變化,。

 

    2)蘆丁的紫外光譜解析

    取蘆丁溶于色譜純甲醇中,加入規(guī)定的試劑,,測定其UV光譜,,試解析光譜并初步判斷其結(jié)構(gòu),。

 

    3)蘆丁的NMR波譜解析

    A.蘆丁的*基硅醚NMR譜的解析

    B.十乙酰化蘆丁的NMR光譜解析

 

    4)蘆丁水解后糖與苷元的鑒定

    A.水解方法:精密稱取蘆丁1g(±0.01g),,加1%硫酸100ml,,加熱40min,放冷靜置,,過濾,。所得沉淀用少許水洗除酸,干燥稱重,,計算苷元與糖的重量比,。然后用乙醇(95%大約10ml)進行重結(jié)晶,即得苷元,。

    B.苷元的鑒定:用紙色譜法與對照品對照,。


 

本實驗講解要點及注意事項

    ①蘆丁提取方法,重點介紹堿-酸法的原理及注意事項,。

    ②定性實驗的目的,、意義及注意事項。

    ③UV及NMR光譜在蘆丁結(jié)構(gòu)檢識中的應(yīng)用,。

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