聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級會員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機(jī)：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
- 個性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
一、實驗?zāi)康?/strong>
（1）學(xué)習(xí)一種鑒定氨基轉(zhuǎn)移作用的簡便方法及其原理,；
（2）進(jìn)一步掌握紙層析的原理和操作技術(shù),；
（3）了解氨基轉(zhuǎn)移作用在中間代謝中的意義,。
二,、實驗原理
氨基移換酶也稱轉(zhuǎn)氨酶,，它能催化α-氨基酸的氨基與α-酮酸的α-酮基互換，這種作用稱為氨基移換作用,。它在生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成與分解等中間代謝中,，在糖、脂肪,、蛋白質(zhì)三類物質(zhì)代謝的相互,、相互轉(zhuǎn)化上，都起著很重要的作用,。任何一種氨基酸進(jìn)行轉(zhuǎn)氨作用時,，都由其專一的轉(zhuǎn)氨酶催化。它們的zui適pH接近7.4,。在各種轉(zhuǎn)氨酶中,，以谷氨酸-草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶（簡稱谷草轉(zhuǎn)氨酶、GOT）及谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（簡稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶,、GPT）活力zui強,。
三、試劑與器材
解剖器具,、離心機(jī),、恒溫水浴、干燥箱,、臺秤,、層析系統(tǒng)等。
1/15mol/L磷酸緩沖液（pH=7.4）,、1%谷氨酸溶液（用KOH中和至中性）,、1%丙酮酸溶液（用KOH中和至中性）、0.1%碳酸氫鉀溶液,、0.05%碘乙酸溶液、15%三氯醋酸溶液,、標(biāo)準(zhǔn)丙氨酸溶液（0.1%）,、標(biāo)準(zhǔn)谷氨酸溶液（0.1%）、0.1%水合茚三酮乙醇溶液,、酚溶劑,。
四、操作方法
將兔擊暈,，迅速解剖,，取出肝臟，在低溫條件下剪碎。稱取勻漿后,，離心取上清液,，即為制備的酶液。體外氨基移換反應(yīng),。紙上層析法檢查每人4個點（標(biāo)準(zhǔn)丙氨酸溶液,、標(biāo)準(zhǔn)谷氨酸溶液、對照上清液,、樣品上清液）,。點樣放入層析罩內(nèi)。用被酚所飽和的水溶液,，平衡后,，用帶小漏斗的玻璃管從層析罩上加飽合酚試劑25ml于層析缸內(nèi)。然后,，立即蓋緊塞子,，當(dāng)溶劑前沿達(dá)到距濾紙上端約2.5cm處，取出濾紙,，晾干或吹干,，以除去酚溶劑，噴灑0.1%茚三酮乙醇溶液,，放入烘箱中顯色氨基酸與茚三酮反應(yīng),，在濾紙上呈現(xiàn)紫紅色斑點。
五,、關(guān)鍵步驟與注意事項
①取動物新鮮組織制備酶液,，防止酶失活。
② 加碘乙酸抑制酶解作用,。
