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一.試劑配制
無菌水ddw： 高溫滅菌,； 分裝；
2XHBS： 280mM NaCl
10mM KCl
1.5 mM Na2HPO4
12 mM glucose
50 mM HEPES
Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 過濾滅菌，分裝,；
2M CaCl2： 過濾滅菌,，分裝。
二. 實(shí)驗(yàn)過程：
1. 鋪細(xì)胞： 選擇狀態(tài)良好的293T細(xì)胞傳代,， 2-3x105個細(xì)胞/35mm dish,。
2. 20-24h后，待細(xì)胞長至鋪滿瓶底約50-70%的時候,，進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。下面就35mm dish為例，采用以下轉(zhuǎn)染體系：
ddw： 105ul
plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul,， 即用4ul）
2M CaCl2： 16.5ul
2XHBS： 125ul
按上述順序,，往eppendorf管中依次加入上述四種試劑。
先將前三者混勻,， zui后加2XHBS,。
一種方法是，加2XHBS時要逐滴加入,， 吹打至微現(xiàn)乳白色,， 立即均勻滴入培養(yǎng)皿，輕輕搖勻后置于培養(yǎng)箱中,，6-8h后換液,。
另一種方法是， 加入2XHBS后立即吹打約40下（不過這個要根據(jù)每個人的力道和吹打的頻率而定,， 建議做一個梯度實(shí)驗(yàn),，吹打不同的次數(shù)看哪次的轉(zhuǎn)染效率高以后就按這個次數(shù)來吹打）， 之后步驟同上,， 立即均勻滴入培養(yǎng)皿,，輕輕搖勻后置于培養(yǎng)箱中，6-8h后換液,。
