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第三法

原理在酸性條件下溴化氰與吡啶聯(lián)苯胺發(fā)生顯色反

應(yīng)，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定H ib多糖衍生物中溴化

氰的含量,。

試劑 （1 )6 0%的吡啶溶液量取吡啶30ml,，加水

20ml，搖勻,，即得,。

(2)2%鹽酸溶液量取鹽酸0.5ml，加水9. 5ml,，搖勻,，

即得。

(3 )吡啶聯(lián)苯胺溶液取聯(lián)苯胺0.5g,，精密稱定,，加

60%吡啶溶液50ml使溶解，再加人2%鹽酸溶液10ml,，搖

勻,，即得。臨用前配制,。

對(duì)照溶液的制備（1)0. 1 m g /m l溴化氰對(duì)照貯備液

取溴化氰10mg,，精密稱定,，加乙腈適量使溶解，加水稀釋

至100ml,，搖勻,，即得。臨用前配制,。

(2 )溴化氰對(duì)照工作液（500ng/ml) 精密量取溴化氰對(duì)

照貯備液lm l,，加水稀釋至200ml，搖勻,，即得,。

供試品溶液的制備取多糖衍生物適量，配制成lOmg/ml

的溶液,，即得,。

測(cè)定法量取吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml，加水2. Oml,，混

勻,，2CTC以下、暗處放置1 5分鐘后,，在波長(zhǎng)520mn處測(cè)定

吸光度,，作為空白對(duì)照。

量取供試品溶液2. O m l加吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml, 混

勻,，20X：以下,、暗處放置1 5分鐘后，在波長(zhǎng)520nm處測(cè)定

吸光度,。

分別量取溴化氰對(duì)照工作液0.1ml,、0.2ml、0.4ml,、

0.6ml,、0.8m l、1. Om l于試管中,，每管依次加水1.9ml,、

1.8ml、1.6ml,、1.4ml,、1.2ml、1.0ml,，加人P比嗤聯(lián)苯胺溶

液2. Oml,，混勻，20°C以下,、暗處放置1 5分鐘后,，在波長(zhǎng)

520mn處測(cè)定吸光度,。

結(jié)果計(jì)算以對(duì)照工作液中溴化氰的含量（ng/ml) 對(duì)其

相應(yīng)的吸光度作線性回歸，求得線性回歸方程,，將供試品溶

液的吸光度代人線性回歸方程,，求得供試品溶液中溴化氰的

含量 B (n g/m l) 。

供試品中溴化氰的含量（ng/mg) = |

100