〔含量測定〕酸性羧甲基纖維素酶活力對照品溶液的
制備取無水葡萄糖對照品適量,,精密稱定,加水制成每lml
含3mg的溶液,,即得,。
標準曲線的制備精密量取對照品溶液L 0ml、2,。0ml,、
4. 0ml、6. 0ml,、8,。0ml,分別置10ml量瓶中,,各加水至刻度,,搖__
勻。分別精密量取上述溶液各0= 5mU置25ml具塞刻度試管
中,,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液(pH t 8)1,。5mU混勻,立即精密
加人3,,5-二硝基水楊酸試液1,。5ml,搖勻5置沸水浴中保溫15
分鐘,取出,,置冰水浴中冷卻10分鐘,,再加水至刻度,搖勻,,靜
置90分鐘,,以相應的試劑為空白,照紫外-可見分光光度法
(通則0401),,在540nm波長處測定吸光度,,以吸光度為縱坐
標,葡萄糖量(mg)為橫坐標,,繪制標準曲線,。
測定法取本品約LOg,精密稱定9置具塞錐形瓶中,,精
密加水100ml,,密塞,旋轉振搖(轉速每分鐘200轉)6 0分
鐘,,濾過,,作為供試品溶液(本液應臨用新制)。精密量取
1%羧甲基纖維素鈉溶液1,。5ml,,置25ml具塞刻度試管中,
精密加人供試品溶液0. 5mU混勻5置50°C水浴中保溫30分
鐘,,取出n照標準曲線制備項下的方法,,自“立即精密加人3,
5-二硝基水楊酸溶液L 5011”起5依法測定吸光度5從標準曲
線上讀出供試品溶液中含還原糖的重量(mg),??瞻坠芗?/span>
入1%羧甲基纖維素鈉溶液1。5ml,,置50°C水浴中保溫30
分鐘,,取出,立即精密加人3,,5-二硝基水楊酸試液L 5ml9
搖勻,,精密加人供試品溶液0。5ml,,混勻,,照標準曲線制備
項下的方法,自“置沸水浴中保溫1 5分鐘”起,,依法進行,。
按下式計算:
X = A X l /0 . 5X100/W八 1一水分)X2
式中X— 酸性羧甲基纖維素酶活力,,U /gl
A— 吸光度在標準曲線上查得的還原糖量,mg;
W— 取樣量
2— 時間換算系數(shù),。
l g 固體酶在50°C±l°C,、pH4. 8 條件下,1 小時水解1%
羧甲基纖維素鈉底物,,產(chǎn)生出相當于lm g葡萄糖的還原糖量
為一個酸性羧甲基纖維素酶活力單位,以U /g表示,。
本品按干燥品計算,,每l g 含酸性羧甲基纖維素酶活力不
得低于150U。
注:[1]3,5-二硝基水楊酸試液:取苯酚6,。9g,,加10% 氫
氧化鈉溶液15ml使溶解,用水稀釋至70ml,,搖勻,,再加亞硫
酸氫鈉6. 9g,振搖使溶解(甲液取酒石酸鉀鈉255g,,加
10%氫氧化鈉溶液300ml使溶解,,再加1%的3,5-二硝基水
楊酸溶液880ml9搖勻(乙液),;將甲液與乙液混合5搖勻,,得黃
色的溶液,貯于棕色瓶中,,4°C放置7 天,,備用。
[2]構櫞酸鹽緩沖液(pH 4. 8) :分別精密量取0. 5mol/L
枸櫞酸溶液60ml,、0. 5mol/L枸櫞酸三鈉溶液100ml,,混勻,精
密量取上述溶液100ml,,加水800ml,以3mol/L鹽酸溶液或
3mol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)p H 值至4,。8,移至1000ml量瓶
中,,加水至刻度,,搖勻,即得,。
[3]1%羧甲基纖維素鈉溶液,;精密稱取l .O g羧甲基纖維
素鈉,置具塞錐形瓶中,,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)
80ml,,稱定重量,85°C±5°C邊加熱邊磁力攪拌至*溶解,
放冷,,再稱定重量,,用枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)補足減失的重
量,搖勻,,以3mol/L鹽酸溶液或3mol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)
p H值至4. 8,,移至100ml量瓶中,加枸櫞酸鹽緩沖液
(pH4.8)至刻度9搖勻,,即得,。
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