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土壤堿性蛋白酶(SALPT)測試盒
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- 上海研生實業(yè)有限公司
- 390 - 720 （具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)）
- 2023-08-11 10:56:21
- 上海市
- 國產(chǎn)
- 977
【詳細說明】
商品詳情：
土壤堿性蛋白酶(SALPT)測試盒測定意義：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化,，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一,。S-ALPT在堿性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機質(zhì)含量,、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān),。
貨號 | 規(guī)格 | 檢測方法 |
YSH3430 | 100管/48樣 | 微量法 |
YSH3430-1 | 50管/24樣 | 可見分光光度法 |
測定原理：
堿性條件下，S-ALPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生,；在堿性條件下,，酪還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰,。
實驗中所需儀器及設(shè)備：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍,、微量石英比色皿/96孔板,、雙蒸水
樣品中AA提取：
1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行室溫勻漿,，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min,；自來水冷卻后,，8000g，,，4℃離心10min,，上清液置冰上待測。
2.細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率20％或200W,，超聲3s，間隔10s,，重復(fù)30次）,；8000g，4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。
3.血清等液體：直接檢測,。
計算公式如下：
1,、血清（漿）LAP活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2,、組織,、細菌或細胞中LAP活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。
LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。
LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L,；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應(yīng)時間，2 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；2000：細菌或細胞總數(shù)，2000萬,。
注意事項：
1. 試劑盒中試劑三,、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存,，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢,。
2. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個樣做預(yù)實驗,，如果測定的吸光值過高（高于2.5）,，用蒸餾水稀釋后再測定。
3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量,。
4．檢出限為100μmol/L,。
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