土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶測試盒

商品詳情：
測定意義

FDA水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化,，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。

測定原理

FDA是一種無色化合物,，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解,，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素,，穩(wěn)定不易被分解,，并在490nm處有強(qiáng)吸收峰，通過檢測490nm處的吸光值變化可計(jì)算得FDA水解酶活性,。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平,、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板,、恒溫水浴鍋。
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1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min,；自來水冷卻后，8000g，,，4℃離心10min,，上清液置冰上待測。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率20％或200W,，超聲3s，間隔10s,，重復(fù)30次）,；8000g，4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測,。

3.血清等液體：直接檢測,。

計(jì)算公式如下：

1,、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2,、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L,；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V樣：加入樣本體積，0.05 mL,；V樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應(yīng)時間,，2 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g,；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬,。

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土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶測試盒淀粉含量測試盒100管/96樣 微量法

淀粉含量測試盒50管/48樣 可見分光光度法

直鏈淀粉含量測試盒100管/96樣 微量法

直鏈淀粉含量測試盒50管/48樣 可見分光光度法

支鏈淀粉含量測試盒100管/96樣 微量法

支鏈淀粉含量測試盒50管/48樣 可見分光光度法

α測試盒100管/48樣 微量法

α測試盒50管/24樣 可見分光光度法

β測試盒100管/48樣 微量法
注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三,、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存,，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢,。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),，如果測定的吸光值過高（高于2.5）,，用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,，因此,，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L,。