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胰糜蛋白酶的制備 
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?nbsp; ：掌握從組織中制備胰糜蛋白酶的原理和方法,。 
【實(shí)驗(yàn)原理】  ：胰糜蛋白酶是胰腺產(chǎn)生的一種消化酶,。初以酶原的形式被合成與分泌，之后在胰蛋白酶的作用下被水解而激活,。胰糜蛋白酶是一種催化肽鍵的肽鏈內(nèi)切酶,，主要切斷色氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸的羧基側(cè)肽鍵,。 
酶絕大多數(shù)都是蛋白質(zhì),，因此一般提純蛋白質(zhì)的方法也適用于酶的提純，所不同的是在提純酶的過程中要不斷地進(jìn)行酶活力的檢測(cè),，本實(shí)驗(yàn)主要涉及提取過程,。 
【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】 
（一）材料和試劑 
1.主要材料：新鮮豬胰臟1個(gè)。 
2.主要試劑： 
2.5mol/LH2SO4溶液,，固體（NH4）2SO4,，氯化鈣粉，1%酪蛋白溶液,，）0.1mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液,，1％BaCl2溶液，5mol/LNaOH溶液,。 
（二）主要器材 
組織搗碎機(jī),、手術(shù)器械、紗布,、漏斗,、透析袋、離心機(jī),、燒杯,、pH計(jì)、離心管,。 
【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】 
1.提取取新鮮豬胰臟,，放在盛有冰冷2.5mol/LH2SO4溶液的容器中，保存在冰箱中待用,。去除胰臟表面的脂肪和結(jié)締組織后,，稱重。用組織搗碎機(jī)粉碎,。然后混懸于兩倍體積的冰冷2.5mol/LH2SO4溶液中,，置于冰箱中過夜。將上述混懸液以3000rpm離心10min,，上層液經(jīng)兩層紗布過濾燒杯中,；將沉淀再混懸于等體積的冰冷2.5mol/LH2SO4溶液中,，再離心，將兩次上層液合并,，即為提取液,。此時(shí)可留樣測(cè)酶的活力。 
2.分離,。 
3.結(jié)晶取分離所得的胰糜蛋白酶溶于3倍體積的水中（此時(shí)可取0.5ml留樣測(cè)酶活力）,，加（NH4）2SO4（1.44g/10ml），用5mol/LNaOH溶液調(diào)pH6.0,，在室溫放置12h即可出現(xiàn)結(jié)晶,，在顯微鏡下觀察結(jié)晶形狀。 
【注意事項(xiàng)】 
1.整個(gè)操作過程在0℃～5℃條件下進(jìn)行,。 
2.實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)采用新鮮胰組織,。 
3.分清實(shí)驗(yàn)過程中每次離心后各保留的是上清液，還是沉淀,。 
4.離子強(qiáng)度,、pH、溫度,、試管的潔凈度等均可影響酶的活性,，如需進(jìn)一步進(jìn)行活性測(cè)定，務(wù)必保證固定的實(shí)驗(yàn)條件,，嚴(yán)格按照程序操作,。