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二胺氧化酶測試盒 微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

貨號：BC1285

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑一：液體 0.25mL×1 支,，4℃保存,。

試劑二：液體 2mL×1 管,，4℃保存。

試劑三：液體 1mL×1 管,，4℃保存,。

產(chǎn)品說明：

    DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺,、肝臟,、腎臟等）、植物和微生物中,。催化多胺氧化為醛,，其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損傷程度,。

    DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫,，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰

聯(lián)茴香胺生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺,，在460nm處有特征吸收峰,，通過測定該波長吸光度增加速率，計算DAO活性,。

自備實驗用品及儀器：

    天平,、低溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96 孔板,、蒸餾水。

操作步驟：

一,、粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿,，然后10000g,，4℃離心20min，取上清,，置冰上待測,。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時間3min）,；然后10000g,，4℃，離心10min,，取上清置于冰上待測,。

3. 血清等液體：直接測定。

二,、測定操作表：

1,、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長460nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、操作表

三、酶活性計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算：

     酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量為一個酶活力單位（U）。

    DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 18×A 460 ÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算：

    酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個酶活力單位。

     DAO 活性（nmol/min/g）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 18×A 460 ÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計算：

     酶活性定義： 在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每10⁴個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H²O²所需的酶量定義為一個酶活力單位。

DAO 活性（nmol/min/10⁴cell）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 18×A₄₆₀ ÷細(xì)胞數(shù)量

 (4) 按液體體積計算

     酶活性定義： 在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個酶活力單位。

    DAO 活性（nmol/min/mL）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T= 18×A₄₆₀

    ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積,，0.2mL,；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.05mL；V 樣總：加入提取液體積,，1mL,；Cpr：

    樣本蛋白濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；T：反應(yīng)時間,，30min

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算：

    酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量為一個酶活力單位（U）,。

    DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 36×A 460 ÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算：

     酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個酶活力單位,。

    DAO 活性（nmol/min/g）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 36×A₄₆₀÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計算：

      酶活性定義： 在pH7.2，溫度為37℃條件下,，每10⁴個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個酶活力單位,。

DAO 活性（nmol/min/10⁴cell）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T   = 36×A₄₆₀÷細(xì)胞數(shù)量

(4) 按液體體積計算

     酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下,，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個酶活力單位,。

    DAO 活性（nmol/min/mL）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T= 36×A₄₆₀

    ε ：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L /mmol/cm；d：96 孔板光徑,，0.5cm,；V 反總：

    反應(yīng)總體積，0.2mL,；V 樣：反應(yīng)中樣本體積,，0.05mL；V 樣總：加入提取液體積,，1mL,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；T：反應(yīng)時間,，30min

注意事項：

 1,、如果OD值小于0.01，適當(dāng)加大提取用樣本量,；OD值大于0.8,，粗酶液可適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本量,。

    2,、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定,。

二胺氧化酶測試盒訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。 
2、部分非常用產(chǎn)品,，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3,、部分產(chǎn)品價格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn),。 
4,、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整,，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。
5、請辦理完貨款后,，將底單等連同收貨人的地址,、姓名、等以傳真,、,、短信、等形式通知我們,。

運(yùn)輸說明：

極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸,。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封,，膠帶層層粘住泡沫盒,，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實驗保駕護(hù)航,。
低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,，再使用泡沫盒密封,，用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護(hù)航,。
常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝,。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中,。