細胞培養(yǎng)基的基本成分
在一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分,。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM 培養(yǎng)液，使用時還需要補加丙酮酸鈉（2-Mercaptoethanol,，2-Me）,。2-Me 對細胞生長有很重要的作用,。有人認為它相當于胎牛血清，有直接刺激細胞增殖作用,。2-Me的活性部分是硫氫基,，其中一個重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽，能誘導(dǎo)細胞的增殖,，為非特異性的激活作用,。同時避免過氧化物對培養(yǎng)細胞的損害。另一個重要作用是促進分裂原的反應(yīng)和DNA 合成,，增加植物凝集素（PHA）對淋巴細胞的轉(zhuǎn)化作用,，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外,，也開始用于一些難以培養(yǎng)的細胞,。2-Me 是一種小分子還原劑，極易氧化,。分子量為78.13,，純的2-Me 是一種無色有刺激味的液體，比重為1.110-1.120（Do20）,，常用終濃度為5×10-5M。常配制成0.1M 的儲存液,，用時每升培養(yǎng)液加0.5ml,。
液體培養(yǎng)基保存
液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存，實驗前放入37℃預(yù)熱,。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12 個月,。液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細胞生長不良,，可以再添加適量L-谷氨酰胺,。
干粉培養(yǎng)基保存
4℃冰箱避光保存，有效期36 個月,。
血清
細胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清,、馬血清、人血清等,，其中牛血清是常用的血清,，分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清,，價格昂貴,。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點,，新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大,。如小牛出生后已哺乳,，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì)，其質(zhì)量明顯不如前兩種,。
血清的質(zhì)量,，種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長，而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同,，尤其是對克隆細胞的生長,，某些批次血清可能含有毒性或抑制細胞生長的物質(zhì)。因此,，在購買大量血清之前,，必須對血清支持細胞生長能力進行檢測，然后再大量購買質(zhì)量好的同一批號的血清,，并注意以下幾點：
（1）需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ – 70℃ 低溫冰箱中,。4℃冰箱中保存時間切勿超過1 個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10％,，因此,，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間,，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂,。
（2）一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌,。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清,。
（3）瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃ -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天,。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝,。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,。
（4）熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍的血清,。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分（complement）滅活,。除非必須,，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,，而且還會影響血清的質(zhì)量,。補體參與反應(yīng)有：細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化,。
（5）切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會變得渾濁,，同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量,。
（6）血清中的沉淀物
絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量,?？捎秒x心3000rpm, 5 分鐘去除，也可不用處理,。
顯微鏡下“小黑點”：經(jīng)過熱處理過的血清,，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點”,，常誤認為血清受污染,。一般情況下，此小黑點不會影響細胞生長,，但如果懷疑血清質(zhì)量,，則應(yīng)立即停止使用，更換另一批號的血清,。
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