日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

復水（有時候也用到脫水，只是順序相反）

溫度：環(huán)境

描述：通過一系列的緩沖液交換將樣品從在100% 甲醇或乙醇的儲存條件中轉(zhuǎn)移到水緩沖液中,。通常從100%的乙醇交換到75%,、50%、25%,、0%,，每次交換后留5 min進行平衡即可。如脫水進行太快或不進行脫水,，樣品形態(tài)將被破壞,，甚至被撕成碎片,。

漂白（可選）

溫度：環(huán)境

描述：通常與3%的過氧化氫孵育，以擺脫內(nèi)部的過氧化物酶和漂白暗色的胚胎

烷基化（可選,，INTAVIS儀器不能完成）

溫度：環(huán)境

描述：三乙醇胺中的乙酸酐用于使組織帶負電荷,，從而降低背景。它被廣泛應(yīng)用,，特別是在植物領(lǐng)域,，用極少的探針就可以增強結(jié)果。

自動化時：乙酸酐在溶液中非常不穩(wěn)定,，它在制備后能用于孵育的時間不超過一分鐘,，因此不可能實現(xiàn)自動化（并且探針通常不需要）。

細胞壁消化（可選,，只在植物中）

溫度：環(huán)境

描述：植物樣品中主要使用鹽酸水解細胞壁,。或者如崩潰酶和纖維素酶等酶類也能被使用,。

滲透（時間要求嚴格）

溫度：環(huán)境或37℃

描述：使探針能接觸樣品組織至關(guān)重要,。這步處理通常使用蛋白酶，主要是蛋白酶K,，但鏈霉蛋白酶和其他蛋白酶也能被使用,。但也有其他的處理方法，如熱處理（蒸汽）或與洗滌劑混合物孵育,。對于蛋白酶K,，甘氨酸通常被用來立即停止蛋白酶K的作用，或者通過數(shù)次換液將蛋白酶K 洗掉,。滲透后,，通常會使用多聚甲醛進行固定。

自動化時：所有蛋白酶應(yīng)足夠穩(wěn)定,，到使用前不會自我分解,，如蛋白酶K。

雜交

溫度：通常50-70℃（RNAse 在37℃）

描述：雜交由幾步組成：

1,，預雜交步驟（可選）逐步交換雜交 緩沖液,，并封閉非特異結(jié)合位點

2，雜交步驟,，與探針孵育

3,，雜交后洗滌步驟，用越來越嚴格的緩沖液進行多次洗滌

4,，通常在雜交后洗脫步驟之間,，進行RNAse消化（可選）來擺脫未結(jié)合的探針減少背景：RNAse緩沖液洗滌，用RNAse處理,，再次RNAse緩沖液洗滌,，所有步驟在37℃進行,。

5，更多的雜交后洗滌

抗體孵育

溫度：環(huán)境或更低

描述：

在此步驟中,，抗體與探針上的抗原結(jié)合

1. 用封閉試劑封閉（如Roche 封閉試劑,，BSA，山羊或綿羊血清）,。在這一步,，所有非特異抗體結(jié)合位點將被蛋白飽和

2， 與抗體孵育,，讓抗體抗原結(jié)合

3,， 洗滌步驟，洗滌未結(jié)合抗體

自動化時：由于基本上所有檢測探針的抗體都是商業(yè)化的,，它們室溫下工作并具有相同的特異性,。抗體結(jié)合在室溫下更快結(jié)合,。

與堿性磷酸酶緩沖液孵育（如NTMT）

溫度：環(huán)境

描述：與新鮮制備的緩沖液孵育,，為堿性磷酸酶顏色反應(yīng)做準備

自動化時：使用堿性磷酸酶偶聯(lián)抗體時，緩沖液儲存過久或使用前制備時會沉淀,。