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囊胚注射實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/10 13:57:20
- 訪問次數(shù) 24
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制作動物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測 病理學(xué)形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗(yàn)儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具,、一次性耗材等
一、技術(shù)定義與核心原理
囊胚注射是將基因修飾后的胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)注入囊胚期胚胎(發(fā)育約3.5天的小鼠胚胎),,通過嵌合體培育獲得基因修飾動物模型的技術(shù),。其核心機(jī)制包括:
嵌合體形成:外源ES細(xì)胞與宿主囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM)融合,,共同發(fā)育為嵌合體后代。
生殖系傳遞:ES細(xì)胞分化為生殖細(xì)胞,,實(shí)現(xiàn)基因修飾的遺傳(需嵌合率>60%),。
時空窗口:囊胚期胚胎細(xì)胞分化程度低,且囊腔結(jié)構(gòu)便于顯微操作,。
生物學(xué)基礎(chǔ):
囊胚由外層滋養(yǎng)層細(xì)胞(發(fā)育為胎盤)和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(發(fā)育為胎兒)構(gòu)成,注射靶向ICM區(qū)域確保ES細(xì)胞參與胚胎發(fā)育,。
二,、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程
(一)前期準(zhǔn)備
步驟 | 關(guān)鍵操作與參數(shù) |
---|---|
ES細(xì)胞制備 | 需多能性驗(yàn)證(如Oct4表達(dá)),,常用129品系或C57BL/6遺傳背景ES細(xì)胞 |
囊胚供體鼠處理 | 超排卵:PMSG(5IU)→ hCG(5IU)→ 與雄鼠合籠 → 取見栓后2.5天的囊胚(8細(xì)胞期胚胎培養(yǎng)過夜獲得) |
顯微注射系統(tǒng)校準(zhǔn) | 注射針內(nèi)徑10-15μm,,單次注入10-15個ES細(xì)胞 |
(二)注射與胚胎移植

存活率控制:注射后囊胚存活率需>90%,,移植胚胎數(shù)≥10枚/受體鼠。
嵌合體鑒定:
毛色嵌合:ES細(xì)胞(如129-agouti)與宿主囊胚(如C57BL/6黑色)毛色差異直觀判斷嵌合率,。
基因型驗(yàn)證:PCR檢測外源基因或熒光標(biāo)記(如GFP),。
(三)遺傳系建立
高嵌合體篩選:選擇毛色嵌合>70%的雄性嵌合鼠,。
生殖系傳遞:嵌合鼠與野生型交配 → F1代基因型檢測 → 建立純合品系。