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囊胚注射實(shí)驗(yàn)

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囊胚注射

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   上海達(dá)為科生物科技有限公司,,位于上海長江軟件園,公司目前具備較好的生物學(xué),、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺,,能夠?yàn)閺V大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測,、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務(wù),。

公司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室,、先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員(博士后)2人,,助理研究員(博士)4人,,核心研究員(碩士)15人,,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué),、蛋白質(zhì)組學(xué),、代謝組學(xué)、生物化學(xué),、病理檢測,、基因檢測等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過高度細(xì)分,、較好的服務(wù)平臺,為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù),。目前,,,,涉及臨床醫(yī)學(xué),、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域,。

我們的目標(biāo)是為了使您的工作更輕松,、更快捷。為了實(shí)現(xiàn)一站式服務(wù)我們不斷更新實(shí)驗(yàn)方法和引進(jìn)新的產(chǎn)品,,控制和降低各種成本,為您的研究加油,。這既是一項(xiàng)長期而艱巨的工作,,又是一項(xiàng)光榮的工作,同時也是我們企業(yè)發(fā)展的動力源泉,。

 

 

 

 

制作動物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測 病理學(xué)形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗(yàn)儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具,、一次性耗材等

一、技術(shù)定義與核心原理

囊胚注射是將基因修飾后的胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)注入囊胚期胚胎(發(fā)育約3.5天的小鼠胚胎),,通過嵌合體培育獲得基因修飾動物模型的技術(shù),。其核心機(jī)制包括:

  1. 嵌合體形成:外源ES細(xì)胞與宿主囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM)融合,,共同發(fā)育為嵌合體后代。

  2. 生殖系傳遞:ES細(xì)胞分化為生殖細(xì)胞,,實(shí)現(xiàn)基因修飾的遺傳(需嵌合率>60%),。

  3. 時空窗口:囊胚期胚胎細(xì)胞分化程度低,且囊腔結(jié)構(gòu)便于顯微操作,。

生物學(xué)基礎(chǔ)
囊胚由外層滋養(yǎng)層細(xì)胞(發(fā)育為胎盤)和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(發(fā)育為胎兒)構(gòu)成,注射靶向ICM區(qū)域確保ES細(xì)胞參與胚胎發(fā)育,。


二,、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

(一)前期準(zhǔn)備
步驟關(guān)鍵操作與參數(shù)
ES細(xì)胞制備需多能性驗(yàn)證(如Oct4表達(dá)),,常用129品系或C57BL/6遺傳背景ES細(xì)胞
囊胚供體鼠處理超排卵:PMSG(5IU)→ hCG(5IU)→ 與雄鼠合籠 → 取見栓后2.5天的囊胚(8細(xì)胞期胚胎培養(yǎng)過夜獲得)
顯微注射系統(tǒng)校準(zhǔn)注射針內(nèi)徑10-15μm,,單次注入10-15個ES細(xì)胞
(二)注射與胚胎移植
  • 存活率控制:注射后囊胚存活率需>90%,,移植胚胎數(shù)≥10枚/受體鼠。

  • 嵌合體鑒定

    • 毛色嵌合:ES細(xì)胞(如129-agouti)與宿主囊胚(如C57BL/6黑色)毛色差異直觀判斷嵌合率,。

    • 基因型驗(yàn)證:PCR檢測外源基因或熒光標(biāo)記(如GFP),。

(三)遺傳系建立
  1. 高嵌合體篩選:選擇毛色嵌合>70%的雄性嵌合鼠,。

  2. 生殖系傳遞:嵌合鼠與野生型交配 → F1代基因型檢測 → 建立純合品系。




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