CRISPR/Cas12a系統(tǒng)實驗
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- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
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- 更新時間 2025/7/9 15:50:52
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制作動物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測 病理學(xué)形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具,、一次性耗材等
一,、系統(tǒng)定義與生物學(xué)起源
CRISPR/Cas12a（原稱 Cpf1）屬于 Class 2 Type V 型 CRISPR 系統(tǒng)，是細(xì)菌與古菌的適應(yīng)性免疫機制,，用于識別并切割入侵的病毒或質(zhì)粒 DNA,。與 Cas9 相比，其du特的工作模式使其在基因編輯,、分子檢測及多基因調(diào)控中展現(xiàn)顯著優(yōu)勢,。
二、核心分子機制與技術(shù)特性
（一）作用流程
（二）關(guān)鍵特性對比（Cas12a vs Cas9）
| 參數(shù) | CRISPR/Cas12a | CRISPR/Cas9 |
|---|---|---|
| 蛋白大小 | 1,200-1,300 氨基酸（更?。?/td> | 1,000-1,600 氨基酸 |
| RNA 依賴 | 僅需 crRNA（無 tracrRNA） | 需 crRNA + tracrRNA 或嵌合 sgRNA |
| crRNA 加工 | 自主 RNase 活性（內(nèi)置加工能力） | 依賴宿主 RNase III 和 tracrRNA |
| 切割末端類型 | 黏性末端（5' 突出） | 平末端 |
| PAM 識別序列 | 5'-TTTN/TTTV-3'（富含 T） | 5'-NGG-3'（富含 G） |
| 核酸酶結(jié)構(gòu)域 | 單一 RuvC 結(jié)構(gòu)域 | HNH + RuvC 雙結(jié)構(gòu)域 |
| 反式切割活性 | 有（可非特異性切割 ssDNA） | 無 |
注：
V 表示 A/C/G（非 T）,，如 5'-TTTA/TTTC/TTTG-3'。
黏性末端 更易觸發(fā)同源重組修復(fù)（HDR）,，提升精準(zhǔn)編輯效率,。
三,、優(yōu)勢與應(yīng)用場景
（一）技術(shù)優(yōu)勢
多基因編輯高效性：
單一 crRNA 陣列可同時靶向多個基因,，無需重復(fù)構(gòu)建 tracrRNA，適用于復(fù)雜通路調(diào)控,。
AT 富集基因組適配性：
對富含 AT 的基因組（如植物、寄生蟲）編輯效率顯著高于 Cas9,。
低脫靶風(fēng)險：
嚴(yán)格依賴 PAM 激活,，且反式切割活性可關(guān)閉,，全基因組脫靶率低于 Cas9。
遞送便捷性：
蛋白更小，更易包裝進(jìn) AAV 等病毒載體,，適合體內(nèi)基因治療。
（二）核心應(yīng)用領(lǐng)域
| 應(yīng)用方向 | 案例 | 優(yōu)勢體現(xiàn) |
|---|---|---|
| 多基因敲除 | 玉米中同步編輯 3 個抗旱基因,，編輯效率 >60% | crRNA 陣列簡化設(shè)計 |
| 精準(zhǔn)基因插入 | 利用黏性末端增強 HDR,，實現(xiàn)人源 FIX 凝血yin子基因定點修復(fù) | 高保真修復(fù) |
| 分子診斷 | 結(jié)合反式切割活性開發(fā) 核酸檢測（CRISPR-DETECT） | 高靈敏度,、無需 PCR 擴增 |
| 抗病毒研究 | 家蠶中編輯 BmNPV 病毒受體基因,，抗病毒效率較 Cas9 提升 40% | 高效切割 AT 富集區(qū) |
| 基因治療載體優(yōu)化 | Cas12b（更小變體）脫靶率較 Cas9 降低 50%，適合臨床 | 高安全性遞送 |
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