3D細(xì)胞培養(yǎng)物在生理上更相關(guān),，并且能更好地代表體內(nèi)組織，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)藥物治療的功效或毒性,。3D細(xì)胞模型越來越多地用于了解疾病機(jī)理和發(fā)現(xiàn)藥物療法,。與2D培養(yǎng)相比，3D細(xì)胞培養(yǎng)可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)藥物治療的功效或毒性,。
         3D Luminescent Cell Viability Assay是一種基于熒光素酶系統(tǒng)的細(xì)胞活力檢測(cè)試劑,，借助ATP依賴的熒光素酶催化的熒光素發(fā)光反應(yīng)，通過化學(xué)發(fā)光信號(hào)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ATP含量,，從而檢測(cè)細(xì)胞活力,。檢測(cè)線性范圍寬,、靈敏度高、穩(wěn)定性好,。
        本試劑盒中由于高純度的熒光素底物,、熱穩(wěn)定的熒光素酶和經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)試劑，使得本產(chǎn)品具有更強(qiáng)的細(xì)胞裂解能力,，可用于3D微組織培養(yǎng)的細(xì)胞活力分析,。在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入本產(chǎn)品使細(xì)胞團(tuán)裂解，釋放出ATP,，即可產(chǎn)生如圖所示的反應(yīng),，發(fā)出穩(wěn)定的光信號(hào)。發(fā)光強(qiáng)度與ATP的量,，即活細(xì)胞數(shù)量在一定范圍內(nèi)成正比,，因此本品可對(duì)活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行定量檢測(cè)。

產(chǎn)品特性：
3D Luminescent Cell Viability Assay檢測(cè)靈敏度高,、線性范圍寬,，可兼容少量樣品檢測(cè)以及大量樣品的高通量篩選。
1,、方便快速：試劑盒中提供的檢測(cè)試劑為即用型,，讀數(shù)穩(wěn)定，檢測(cè)速度快,，完成檢測(cè)僅需約 10 分鐘,；
2、靈敏度高：應(yīng)用于 3D 微組織檢測(cè)具有更高的信噪比,；
3,、快速：添加試劑后可在 30min 或更短時(shí)間內(nèi)記錄數(shù)據(jù)；
4,、發(fā)光信號(hào)更穩(wěn)定：發(fā)光信號(hào)半衰期超穩(wěn)定,，通常＞3 小時(shí)。
5,、裂解能力更強(qiáng)：經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)試劑具有更強(qiáng)的細(xì)胞裂解能力,，適用于 3D 微組織培養(yǎng)的細(xì)胞活力分析；
6,、高通量：可兼容少量樣品檢測(cè)以及大量樣品的高通量篩選,。

適用于生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選,、細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性試驗(yàn)等。

試劑準(zhǔn)備：
1,、試劑融化：實(shí)驗(yàn)前一天將試劑取出,，置于 4℃過夜融化,。也可在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天將試劑取出，置于室溫融化,，或放置于 22℃水浴融化,，但需要注意水溫不可超過 25℃。
2,、平衡至室溫：若試劑在非室溫條件下融化,，使用前可將其置于 22℃水浴，確保試劑平衡至室溫后再用于檢測(cè),。注：一般針對(duì) 5mL 包裝需要約 10min,；50mL 包裝需要約 20min,。
3,、混勻：使用前輕柔顛倒 5 次使溶液混合均勻。
檢測(cè)步驟：
1,、 使用適合進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的 96 孔板,，在其中加入含有細(xì)胞培養(yǎng)基的微組織。
注：（1）制備樣品體積和微組織特性（例如,，大小,、數(shù)量、培養(yǎng)天數(shù)等）應(yīng)針對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化,；（2）樣品的總 ATP 含量應(yīng)保持在 10μM 以下（測(cè)定線性范圍上限濃度）,；（3）多孔板必須與使用的光度計(jì)兼容。
2,、 將測(cè)試化合物添加到實(shí)驗(yàn)孔中,，并根據(jù)您的培養(yǎng)方案進(jìn)行孵育。
注：確保樣品和測(cè)試化合物的體積足夠低,，以允許添加等體積的試劑,，然后進(jìn)行混合，而不會(huì)造成孔間污染,。
3,、 將板及其內(nèi)容物平衡至室溫(22-25℃)約 30 分鐘。
4,、 添加與每個(gè)孔中存在的細(xì)胞培養(yǎng)基體積相等的 3D Reagent 至檢測(cè)孔中（例如,，對(duì)于 96 孔板，將 100μl 3D Reagent 添加到 100μl 含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中）,。
5,、 劇烈混合內(nèi)容物 5 分鐘以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。
注意：混合對(duì)于從 3D 微組織中有效提取 ATP 非常重要,。
6,、 讓板在室溫下再孵育 25分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào),。
7、 記錄發(fā)光,。
注：板內(nèi)不均勻的發(fā)光信號(hào)可能是由溫度梯度,、細(xì)胞接種不均勻或多孔板中的邊緣效應(yīng)引起的。

1,、溫度：試劑中含有熒光素酶,，反復(fù)凍融會(huì)影響其活性。建議分裝后置于-20℃避光保存,。試劑及細(xì)胞樣品使用前均需平衡至室溫,，以避免酶催化效果的影響；
2,、化學(xué)因素：熒光素酶的反應(yīng)速率和發(fā)光強(qiáng)度受化學(xué)環(huán)境影響,。不同類型的培養(yǎng)基和血清中發(fā)光強(qiáng)度和衰減速率存在差異。另外,，藥物含量較高時(shí)可能會(huì)干擾熒光素酶反應(yīng),，從而影響發(fā)光信號(hào)。建議設(shè)置含有藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)照孔以排除溶劑的干擾;
3,、光敏感：本試劑對(duì)光敏感,，如果儲(chǔ)存時(shí)暴露在光照下，會(huì)加快發(fā)光強(qiáng)度的衰減,。如果試劑從原來的容器轉(zhuǎn)移,，請(qǐng)確保避光保存；
4,、ATP污染：建議操作時(shí)佩戴口罩和乳膠手套,，避免接觸可能受到污染的表面和設(shè)備。操作時(shí)避免多次將槍頭插入試劑瓶中,。

1,、低于-10℃避光保存。為保證最佳使用性能,，長(zhǎng)期存儲(chǔ)時(shí),，建議置于-70℃。
2,、本品反復(fù)凍融6個(gè)循環(huán)仍可保持穩(wěn)定,。
3、分裝可能導(dǎo)致ATP污染風(fēng)險(xiǎn),，避免分裝,。