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EG24512S LightNing® BbsI內(nèi)切酶
- 公司名稱 蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) EG24512S
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/4/11 17:33:12
- 訪問次數(shù) 27
快速限制性內(nèi)切酶?DNA修復(fù)與重組?基因克隆與載體構(gòu)建PCR產(chǎn)物酶切驗(yàn)證
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供貨周期 | 兩周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
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LightNing® BbsI內(nèi)切酶組成
組分 | 規(guī)格 |
LightNing® BbsI | 25 μl |
10× CutOne® Buffer | 1 ml |
10× CutOne® Color Buffer | 1 ml |
特性和用法
LightNing® BbsI內(nèi)切酶,,可在5~15 min內(nèi)完成反應(yīng)
u建議反應(yīng)條件
1× CutOne®緩沖液,;
37℃溫育;
參照“DNA 快速酶切流程”配制反應(yīng)體系,。
u失活條件
80℃溫育20 min
u甲基化敏感性
對(duì) Dam 甲基化不敏感,、對(duì) Dcm 甲基化不敏感、對(duì) CpG 甲基化不敏感。
u存儲(chǔ)條件
-20℃
相關(guān)問答
Q:為什么在CutOne® Buffer中加入HSA,?
A:一些酶在反應(yīng)過程中需要HSA的參與,,我們?cè)?/span>CutOne® Buffer中添加了HSA,避免反應(yīng)中額外添加組分,,使得酶切反應(yīng)更加便捷,。
Q:HSA的添加對(duì)于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能會(huì)產(chǎn)生什么樣的影響,?
A:在我們的測(cè)試中未曾發(fā)現(xiàn)HSA對(duì)于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能有任何影響,。在有些情況下,對(duì)于部分的酶切反應(yīng)有促進(jìn)作用,。
Q:我需要嚴(yán)格遵守5~15 min的酶切時(shí)間嗎,?能夠延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間嗎?
A:雷霆系列限制性內(nèi)切酶經(jīng)過改造可以將酶切時(shí)間縮短至5~15 min,。同樣也消除了限制性內(nèi)切酶的星活性(長(zhǎng)時(shí)間反應(yīng)造成的非特異性消化),,在說明書中告知的星活性出現(xiàn)的時(shí)間范圍內(nèi)可以適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。
Q:我什么時(shí)候應(yīng)當(dāng)考慮星活性對(duì)于酶切反應(yīng)的影響,?
A:如果額外的酶切條帶對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)產(chǎn)生影響時(shí)我們應(yīng)當(dāng)考慮星活性對(duì)于酶切反應(yīng)的影響,。例如:進(jìn)行基因型、突變型分析或克隆時(shí)我們應(yīng)當(dāng)避免星活性的產(chǎn)生,。避免星活性的有效方法:適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體積(較小的反應(yīng)體積容易造成甘油體積達(dá)到或超過總反應(yīng)體積的5%),;不進(jìn)行超長(zhǎng)時(shí)間孵育(過夜消化極易產(chǎn)生星活性)。
Q:有哪些關(guān)鍵因素會(huì)導(dǎo)致星活性,?
A:長(zhǎng)時(shí)間孵育,、過量的酶、高甘油含量(通常高于5%),、較小的反應(yīng)體系等因素都會(huì)導(dǎo)致星活性的產(chǎn)生,。
Q:未經(jīng)純化的PCR產(chǎn)物直接酶切要怎樣設(shè)定體系?
A:反應(yīng)體系推薦由這些內(nèi)容組成:10 μl PCR產(chǎn)物,、2 μl 10×CutOneTM Buffer,、1~2 μl相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶、ddH2O補(bǔ)齊到30 μl,。酶的用量根據(jù)PCR產(chǎn)物的濃度而定,,只加入2 μl反應(yīng)緩沖液的原因是PCR反應(yīng)中存在對(duì)應(yīng)的鹽離子和金屬離子,適當(dāng)減少反應(yīng)緩沖液的用量以保證最終反應(yīng)體系中的環(huán)境適宜限制性內(nèi)切酶發(fā)揮功能,。
Q:限制性內(nèi)切酶簡(jiǎn)并性識(shí)別位點(diǎn)一定是回文的嗎,?
A:大多數(shù)二型限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列是回文的,而且是特定的堿基序列,。然而有些限制性內(nèi)切酶具有簡(jiǎn)并性識(shí)別位點(diǎn),,也就是說識(shí)別位點(diǎn)中有一個(gè)或以上的堿基對(duì)是非特異的(例如:BsrfI識(shí)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T)。對(duì)于這樣的具有簡(jiǎn)并性識(shí)別位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶,只要是符合要求的序列皆能被識(shí)別并且被正確地切割(例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT,,其中兩個(gè)并不是回文的,,仍然能被BsrFI識(shí)別并且切割)。