EG25503S LightNing® AseI內(nèi)切酶
- 公司名稱 蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 EG25503S
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/4/11 16:56:50
- 訪問次數(shù) 25
聯(lián)系方式:耿先生18934597460 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
供貨周期 | 兩周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
---|
LightNing® AseI內(nèi)切酶組成
組分 | 規(guī)格 |
LightNing® AseI | 100 μl |
10× CutOne® Buffer | 1 ml |
10× CutOne® Color Buffer | 1 ml |
特性和用法
LightNing® AseI內(nèi)切酶,,可在5~15 min內(nèi)完成反應(yīng)
u建議反應(yīng)條件
1× CutOne®緩沖液;
37℃溫育,;
參照“DNA 快速酶切流程”配制反應(yīng)體系,。
u失活條件
80℃溫育20 min。
u甲基化敏感性
對于被 EcoBI 甲基化的 DNA,,剪切可能受阻,。
u存儲條件
-20℃
相關(guān)問答
Q:為什么在CutOne® Buffer中加入HSA?
A:一些酶在反應(yīng)過程中需要HSA的參與,,我們在CutOne® Buffer中添加了HSA,,避免反應(yīng)中額外添加組分,使得酶切反應(yīng)更加便捷,。
Q:HSA的添加對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能會產(chǎn)生什么樣的影響,?
A:在我們的測試中未曾發(fā)現(xiàn)HSA對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能有任何影響。在有些情況下,,對于部分的酶切反應(yīng)有促進作用,。
Q:我需要嚴(yán)格遵守5~15 min的酶切時間嗎?能夠延長反應(yīng)時間嗎,?
A:雷霆系列限制性內(nèi)切酶經(jīng)過改造可以將酶切時間縮短至5~15 min,。同樣也消除了限制性內(nèi)切酶的星活性(長時間反應(yīng)造成的非特異性消化),在說明書中告知的星活性出現(xiàn)的時間范圍內(nèi)可以適當(dāng)延長反應(yīng)時間,。
Q:我什么時候應(yīng)當(dāng)考慮星活性對于酶切反應(yīng)的影響,?
A:如果額外的酶切條帶對于實驗結(jié)果會產(chǎn)生影響時我們應(yīng)當(dāng)考慮星活性對于酶切反應(yīng)的影響。例如:進行基因型,、突變型分析或克隆時我們應(yīng)當(dāng)避免星活性的產(chǎn)生,。避免星活性的有效方法:適當(dāng)擴大反應(yīng)體積(較小的反應(yīng)體積容易造成甘油體積達到或超過總反應(yīng)體積的5%);不進行超長時間孵育(過夜消化極易產(chǎn)生星活性),。
Q:有哪些關(guān)鍵因素會導(dǎo)致星活性,?
A:長時間孵育,、過量的酶、高甘油含量(通常高于5%),、較小的反應(yīng)體系等因素都會導(dǎo)致星活性的產(chǎn)生,。
Q:未經(jīng)純化的PCR產(chǎn)物直接酶切要怎樣設(shè)定體系?
A:反應(yīng)體系推薦由這些內(nèi)容組成:10 μl PCR產(chǎn)物,、2 μl 10×CutOneTM Buffer,、1~2 μl相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶、ddH2O補齊到30 μl,。酶的用量根據(jù)PCR產(chǎn)物的濃度而定,,只加入2 μl反應(yīng)緩沖液的原因是PCR反應(yīng)中存在對應(yīng)的鹽離子和金屬離子,適當(dāng)減少反應(yīng)緩沖液的用量以保證最終反應(yīng)體系中的環(huán)境適宜限制性內(nèi)切酶發(fā)揮功能,。
Q:限制性內(nèi)切酶簡并性識別位點一定是回文的嗎,?
A:大多數(shù)二型限制性內(nèi)切酶的識別序列是回文的,而且是特定的堿基序列,。然而有些限制性內(nèi)切酶具有簡并性識別位點,,也就是說識別位點中有一個或以上的堿基對是非特異的(例如:BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T)。對于這樣的具有簡并性識別位點的限制性內(nèi)切酶,,只要是符合要求的序列皆能被識別并且被正確地切割(例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT,,其中兩個并不是回文的,仍然能被BsrFI識別并且切割),。