1,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法
陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,,將DNA分子包裹入內(nèi),,形成DNA脂復(fù)合物,,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,,再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,,是目前實驗室轉(zhuǎn)染方法之一,,其轉(zhuǎn)染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法,。
2,、磷酸鈣共沉淀法
該方法可重復(fù)性差,而且磷酸鈣溶液對溫度,、pH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感,,對細胞尤其是原代細胞毒性較大,也不能采用RPMI培養(yǎng)基,,因為其含有高濃度的磷酸鹽,。
3、電穿孔轉(zhuǎn)染法
電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的小孔促使DNA分子進入胞內(nèi),,這種方法就是電穿孔,。
當遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時可以用電穿孔法轉(zhuǎn)染。
一般情況下,,高電場強度會殺死50%-70% 的細胞?,F(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑,可以大大的降低細胞的死亡率,,同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率,。
4、病毒感染
對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細胞系可以采用病毒感染,,腺病毒,,腺相關(guān)病毒,逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動物細胞體內(nèi)外的基因轉(zhuǎn)染,,轉(zhuǎn)染效率比較高,,適用于較難轉(zhuǎn)染的細胞,。
但是插入的片段長度有一定限制,最重要的是技術(shù)難度比較高,,在一般實驗室中很難普及,,而且某些病毒起效時間比較慢,跟不上細胞這種快速繁殖的速度,,如果只是做簡單細胞系的轉(zhuǎn)染性價比不高,。
沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗,理想的方法應(yīng)根據(jù)細胞類型和實驗需要進行選擇,,如果只是在細胞水平做,,而且用的是簡單細胞系,那么脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是綜合比較起來不錯的一個方法,。
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