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本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR,，即開即用,，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
戈氏放線菌PCR檢測試劑盒使用方法：
一,、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1.注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為7，6，5,，4,，3，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）。
4.在7號管中加入5μL 1×10E8拷貝/μL的陽性對照,，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用,。
5.換槍頭,，在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。
6.換槍頭,，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
7.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。
二,、樣品DNA的制備
8.如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取,，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照）,，一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4拷貝/μL,，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC,。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,，則PC和NC的體積也必須是200μL,。
9.用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒兼容,。
三,、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
10.如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照,。如果做2-3次重復(fù),，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11.產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù),。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）。
相關(guān)產(chǎn)品
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