人心肌成纖維細胞（永生化）
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/2/11 23:54:14
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一,、永生化人心肌成纖維細胞簡介：
雖然原代人心肌成纖維細胞更能真實地反映心肌成纖維細胞在人體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面由于人體心肌組織非常珍貴,，原代分離培養(yǎng)人心肌成纖維細胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗要求較高,，另一方面此原代細胞在體外不能多次傳代，這些不利因素制約了原代人心肌成纖維細胞在實驗室的廣泛應(yīng)用,。我公司的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養(yǎng)及細胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗,，成功建立了永生化人心肌成纖維細胞。心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官,，主要功能是提供壓力，把血液運行至身體各個部分,。心臟的作用是推動血液流動,，向器官、組織提供充足的血流量,，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì),，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機鹽,、尿素和尿酸等）,，使細胞維持正常的代謝和功能。心臟中,，心肌成纖維細胞約占正常心肌組織細胞總數(shù)的60%-70%,，是心臟中非心肌細胞的主要組成部分，廣泛存在于心臟組織中，包圍心肌細胞,，連接心肌細胞間質(zhì),，與缺血性心臟病、炎癥,、肥大,、梗死等病理狀態(tài)密切相關(guān)。
本公司生產(chǎn)的永生化人心肌成纖維細胞采用酶解法和基因轉(zhuǎn)染制備而來,，細胞總量約為1×106/T25方瓶,，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
二,、 使用方法
1 ,、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶,， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時,， 以穩(wěn)定細胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長,，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,， 用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）棄上清,，沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 ,、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min,，離心 5min,；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中,；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）,。
4,、細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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