羊小腸上皮細(xì)胞（永生化）
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
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- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/11 23:53:54
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一,、永生化羊小腸上皮細(xì)胞簡(jiǎn)介：
雖然原代羊小腸上皮細(xì)胞最更能真實(shí)地反映小腸上皮細(xì)胞在羊體內(nèi)的生理狀態(tài),，但是一方面由于原代分離培養(yǎng)羊小腸上皮細(xì)胞周期長(zhǎng)及對(duì)技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)要求較高，另一方面此原代細(xì)胞在體外不能傳代,，每次取材和分離培養(yǎng)原代羊小腸上皮細(xì)胞比較麻煩,，這些不利因素制約了原代羊小腸上皮細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用。我公司的研究團(tuán)隊(duì)擁有多年原代細(xì)胞分離培養(yǎng)及細(xì)胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗(yàn),，成功建立了永生化羊小腸上皮細(xì)胞,。小腸是主要的消化器官，它含有腸液,、胰液和膽汁,，分別都含有消化蛋白質(zhì)、糖,、和脂肪的酶,，能對(duì)蛋白質(zhì)、糖,、脂肪進(jìn)行消化，使之變?yōu)楹?jiǎn)單的物質(zhì),，如氨基酸,、葡萄糖、甘油三脂等，同時(shí)膽汁能對(duì)脂肪進(jìn)行分解,，促進(jìn)脂肪的消化,。因此營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要在小腸被消化，是人體的主要消化器官,。而小腸上皮細(xì)胞有分泌作用,，所以研究小腸上皮細(xì)胞對(duì)研究小腸功能有重要意義。
本公司生產(chǎn)的永生化羊小腸上皮細(xì)胞采用酶解法和基因轉(zhuǎn)染制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為1×106/T25方瓶,，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
二,、 使用方法
1 ,、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶,， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí),， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開(kāi)瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng),，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 ,、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 ,、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min,，離心 5min,；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中,；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過(guò)夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存）,。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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