LabFD AgeI 快速內切酶

產品貨號：F3501S

儲存條件：-20℃

同裂酶：AsiGI, CspAI, BshTI, PinAI,；（注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。）

產品組成：

產品簡介：

LabFD™ 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶,，適用于質粒 DNA,、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。

所有 LabFD AgeI 快速內切酶在通用的LabFD™或LabFD™ Color Buffer中都具有優(yōu)良的活性,，能夠在 5~15 分鐘內完成酶切,。此外，蘭博利德去磷酸化,、連接試劑在LabFD™ Buffer 中均具有 100% 活性,，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接”的體驗,。LabFD™ Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料,，可將產物直接用于凝膠電泳。LabFD™ Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近,；黃色染料與 10 bp雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近,。

建議反應條件：

1×LabFD™緩沖液；37℃溫育,；參照“DNA 快速酶切流程”配制反應體系,。

失活條件：

80℃溫育 20 min,。

質量控制

功能活性檢測:

最適反應溫度下，在 20ul 反應體系中,，1ul LabFD™ AgeI 能夠在 15min 內wanquan消化 1ug p615 DNA,。

超長時間溫育檢測：

最適反應溫度下，將 1ul LabFD™ AgeI 與 1ug p615 DNA共同溫育 3h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測：

37℃下,，使用 10 倍酶量的 LabFD™ AgeI 消化 DNA 底物,，回收酶切產物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過95% 的酶切產物重新連接,。將連接產物再次回收后,，使用相同的內切酶可以重新切開 95% 以上的連接產物。

非特異性內切酶活性檢測：

最適反應溫度下,，將 1ul LabFD™ AgeI 與 1ug 超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4h,，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態(tài),。

藍白斑檢測

使用 1μl  LabFD™ AgeI消化含有 lacZα 基因且僅在該基因上具有1個酶切位點的特定載體,。將酶切產物重新連接后轉化到大腸桿菌感受態(tài)細胞中，涂布在含有X-gal,、IPTG 和相應抗生素的LB平板培養(yǎng)基上生長,。成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以正確表達，并生長出藍色菌落,；而因酶切末端降解等原因未能重新連接的產物將得到白色菌落,。對于 LabFDTM 系列限制酶而言，白色菌落的比例應當小于 1%,。

使用方法：

1. DNA 快速酶切流程（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

2. 
   

a. 本體系適用于經過純化的 PCR 產物酶切,。未純化的 PCR 產物具備一定的離子強度，10× LabFD™ Buffer 加入量可適當減少至2μl,。但由于DNA 聚合酶同時具有外切酶活性,，會影響酶切產物，因此如下一步需進行克隆等操作,，建議酶切前對PCR產物進行純化,；

（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴,；

（3）37℃溫育 15min（質粒）,，或 15~30min（PCR 產物），或 30~60min（基因組 DNA）；

（4）80℃溫育 20min 即可使酶失活,，停止反應（可選）,；

（5）如果使用 LabFD™ Color Buffer 進行酶切反應，得到的產物可以直接進行上樣電泳,。

2.雙酶切或多酶切

（1）每種快速內切酶的用量為 1ul,，并根據(jù)需要適當擴大反應體系；

（2）所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10,；

（3）如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同,，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶,，在其最適反應溫度下進行酶切反應,。

3.適用于質粒的擴大反應體系

注：如果總反應體系大于 20ul，應適當增加溫育時間,，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴,。

不同 DNA 中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自 LABLEAD 限制酶標準反應體系下的檢測,。