Sgel限制性內(nèi)切酶

產(chǎn)品貨號(hào)：F1501S

儲(chǔ)存條件：-20℃

SgeI 可識(shí)別與切割含有 5-mC 位點(diǎn)的 DNA 靶標(biāo)序列，一條鏈或雙鏈甲基化均可被識(shí)別,。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組,、能夠在 5~15 分鐘內(nèi)精確完成 DNA 切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA,、PCR 產(chǎn)物或基因組DNA 等的快速酶切,。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15 分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer,，大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系,；良好的酶活冗余度， 輕松應(yīng)對(duì)底物過量或困難模板酶切,。此外,，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性,，支持一管化反應(yīng),，提升“酶切-修飾-連接”的體驗(yàn)。

酶活定義

在 1×SgeI Buffer 條件下,，1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反應(yīng)體系中37℃孵育1 h,，不斷增加酶量，直至酶切產(chǎn)物DNA帶型不隨著酶量的增加而發(fā)生變化,，此時(shí)酶量定義為1 U,。

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)

將 3U Sgel 與超螺旋質(zhì)粒 DNA 在 37℃溫育 4 h,，通過DNA電泳檢測(cè)質(zhì)粒無(wú)變化。

核酸外切酶殘留檢測(cè)

將 5U Sgel 與雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 1 h,，通過 DNA 電泳檢測(cè)雙鏈DNA 底物無(wú)變化。

注意事項(xiàng)

1. 底物至少需要 2 個(gè) SgeI 識(shí)別序列才能有效酶切,。

2. 甲基化 DNA wanquan酶切取決于 SgeI 的識(shí)別位點(diǎn)的數(shù)量,，另外由于識(shí)別位點(diǎn)酶切產(chǎn)生的DNA產(chǎn)物會(huì)促進(jìn)SgeI

的非特異性酶切，因此建議酶切時(shí)優(yōu)化SgeI酶量用于酶切反應(yīng),。

使用方法

 1. DNA 酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

注：反應(yīng)體系可以按比例放大或縮小,。反應(yīng)時(shí)間不建議超過 1 h。

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋）,，然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴,；

③ 37℃溫育1 h；

④ 80℃溫育 20 min即可使酶失活,，停止反應(yīng)（可選）,。

  2.雙酶切或多酶切

每種快速內(nèi)切酶的用量為 1ul，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系,；

所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的 1/10,；

如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切,，再添加最適溫度較高的酶,，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

注：如果總反應(yīng)體系大于 20ul,，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間,，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴,。

甲基化修飾影響