BspQI 限制性內(nèi)切酶

產(chǎn)品貨號：F3503S

儲存條件：-20℃

同裂酶：SapI, LguI, PciSI,；（注： 同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性,。）

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

BspQI 屬于 Type IIS 型限制酶，識別非回文序列,，并在識別序列之外進行切割,，常用于 Golden Gate 組裝。經(jīng)過優(yōu)化的反應 Buffer

使 BspQI 最大限度發(fā)揮功能,，同時反應緩沖液包含重組白蛋白,，其可增強多種酶的穩(wěn)定性。

建議反應條件

1× HN 緩沖液,；50℃溫育,；參照“DNA 酶切流程”配制反應體系。

失活條件

80℃溫育 20 min,。

活性定義

1 活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應體系中,，50℃ 1 h 內(nèi)wanquan酶切1 µg λDNA 所需的酶量

質(zhì)量控制

超長時間溫育檢測

最適反應溫度下，將 10 U BspQI 與 1 μg λDNA 共同溫育 3 h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,，延時

酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應溫度下，使用 10 U BspQI 消化底物,，回收酶切產(chǎn)物,。在 22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將酶切產(chǎn)物重新連接。

將連接產(chǎn)物再次回收后,，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物,。

DNase 殘留檢測

將 10 U BspQI 與雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過 DNA 電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化,。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

a. DNA 底物中應不含ben fen,、氯仿、乙醇,、EDTA,、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響 BspQI 酶活性,；

（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋）,，然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

（3）50℃溫育 50min-1h,；

（4）80℃溫育 20min 即可使酶失活,，或者通過吸附柱或benfen / 氯仿純化終止反應。

2.注意事項

① 反應體系中加入的酶體積不應超過總體積的 10%,，避免酶中過多的甘油引起星號活性,；

② 限制性內(nèi)切酶存儲緩沖液中的添加劑 ( 例如甘油、鹽 ) 與底物溶液中的污染物 ( 例如鹽,、EDTA 或乙醇等 ) 相同,，反應體積越小，酶切反應抑制效應越強,。

不同 DNA 中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響