LabFD PspGI(EcorII) 快速內切酶

貨號：F5560S

儲存條件：-20℃

同裂酶：EcoRII，MvaI,，BstNI, BciT130I, BseBI, AjnI, Psp6I, Bst2UI

注： 同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性,。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

LabFD™快速內切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內精確完成DNA切割的高保真限制性內切酶,，適用于質粒DNA,、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內切酶具有如下特點：5~15分鐘內即可完成酶切；共用一種酶切Buffer,，大大簡化酶切反應體系,；良好的酶活冗余度，輕松應對底物過量或困難模板酶切,。此外,，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性,，支持一管化反應,，提升“酶切-修飾-連接”的體驗。

建議反應條件

1×LabFD™緩沖液,；

37℃溫育,；

參照“DNA快速酶切流程”配制反應體系。

失活條件

80℃溫育 20 min,。

功能活性檢測

最適反應溫度下,，在20ul反應體系中，1ul LabFD™PspGI能夠在15min內wanquan消化1ugλDNA(Dcm^-),。

超長時間溫育檢測

最適反應溫度下,，將1ul LabFD™  PspGI與1ugλDNA(Dcm^-)共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性,。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應溫度下，使用1ul LabFD™  PspGI消化底物,，回收酶切產(chǎn)物,。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,，使用相同的內切酶可以重新切開連接產(chǎn)物,。

非特異性內切酶活性檢測

最適反應溫度下，將1ul LabFD™  PspGI與1 μg超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4 h 后,，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,，少于10%的質粒DNA轉變成缺刻或線性狀態(tài)。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

a. 本體系適用于經(jīng)過純化的 PCR 產(chǎn)物酶切,。未純化的 PCR 產(chǎn)物具備一定的離子強度,，DNA 聚合酶同時具有外切酶活性，會影響酶切產(chǎn)物,，因此如下一步需進行克隆 等操作,，建議酶切前對 PCR 產(chǎn)物進行純化。

2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋）,，然后瞬時離心以收集掛壁液滴,；

3) 75℃溫育 15 min（質粒）,，或 15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或 30~60 min（基因組 DNA）,；

4) 酚氯仿抽提或柱純化（可選）；

5) 如果使用 LabFD™ Color Buffer 進行酶切反應,，得到的產(chǎn)物可以直接進行上樣電泳,。

2.雙酶切或多酶切

1) 每種快速內切酶的用量為1ul，并根據(jù)需要適當擴大反應體系,；

2) 所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的1/10,；

3) 如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切,，再添加最適溫度較高的酶,，在其最適反應溫度下進行酶切反應。

3.適用于質粒的擴大反應體系

注：如果總反應體系大于20ul,，應適當增加溫育時間,，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴,。

不同DNA中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自LABLEAD限制酶標準反應體系下的檢測,。