細(xì)胞漿,、細(xì)胞核及細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒實(shí)驗(yàn)流程：
1,、試劑準(zhǔn)備
1.1準(zhǔn)備溶液
1.1.1室溫融解試劑盒中的各種溶液,，溶解后除結(jié)構(gòu)蛋白提取液外，其他試劑立即置于冰上,；
1.1.2 結(jié)構(gòu)蛋白提取液溶解后,，可放置于37℃水浴中溫浴至透明后，常溫放置,。
1.2蛋白提取工作液的準(zhǔn)備
1.2.1胞漿蛋白提取工作液的準(zhǔn)備：臨用前,，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時胞漿蛋白提取液的需要量,，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。
1.2.2胞核蛋白提取工作液的準(zhǔn)備：臨用前,，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時胞核蛋白提取液的需要量,，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。
1.2.3膜蛋白提取工作液的準(zhǔn)備：臨用前,，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時膜蛋白提取液的需要量,，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。
1.2.4 結(jié)構(gòu)蛋白提取工作液的制備：臨用前,，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時結(jié)構(gòu)蛋白提取液的需要量,，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。

2,、對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
2.1胞漿蛋白提取
2.1.1加2.0ml（2.0×107細(xì)胞 ）的胞漿蛋白提取工作液，在4℃條件下震蕩20分鐘,；
2.1.2準(zhǔn)備1-5ml的注射器,，用注射器吹打步驟1震蕩過的溶液50-90次，在4℃條件下,，15000g離心10分鐘,。取上清液存于EP管中,，即為胞漿蛋白；
2.2胞核蛋白的提取取
2.1.2步驟獲得的沉淀物加入4.0ml/20million cells冰浴的胞漿蛋白提取工作液,，在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘,，棄去上清液,，沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘,，4℃條件下15000g離心10分鐘,，上清液為細(xì)胞核蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存,；
2.3胞膜蛋白的提取在步驟2.2中的沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘,，4℃條件下15000g離心10分鐘，上清液為細(xì)胞膜蛋白,，轉(zhuǎn)入EP管并保存,。
2.4結(jié)構(gòu)蛋白的提取在步驟2.3的沉淀物中加入常溫或37℃水浴過的透明的結(jié)構(gòu)蛋白提取工作液 0.5ml/20million cells, 4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘,，保存上清液即為細(xì)胞骨架蛋白,；
2.5待測蛋白的保存待檢測濃度的蛋白存于-70℃,。

3.對于組織樣品：
3.1胞漿蛋白提取
3.1.1加2.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4℃條件下研磨，重復(fù)勻漿兩次,，至全部溶解,；
3.1.2在4℃條件下,，震蕩5分鐘，18000g離心10分鐘,。取上清液存于EP管中,，即為胞漿蛋白，沉淀物繼續(xù)實(shí)驗(yàn),；
3.2胞核蛋白的提取在步驟3.1.2中的沉淀物中加4.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4℃條件下震蕩5分鐘,，4℃條件下18000g離心10分鐘，棄去上清液,；沉淀物中加1.0ml/g冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘,，4℃條件下18000g離心10分鐘，上清液為細(xì)胞核蛋白,，轉(zhuǎn)入EP管并保存,；
3.3胞膜蛋白的提取在步驟3.2中的沉淀物中加1.0ml/g冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘,，上清液為細(xì)胞膜蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存,；
3.4結(jié)構(gòu)蛋白的提取
3.4.1在步驟3.3中的沉淀物中加入常溫或37℃水浴過的透明的結(jié)構(gòu)蛋白提取工作液0.5ml/g，震蕩5分鐘,，4℃條件下18000g離心10分鐘,，保存上清液,；
3.4.2在3.4.1步中的沉淀物中加1.5ml/g冰凍的胞漿蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘,保存上清液,；
3.4.3混合前兩步的上清液，此為骨架蛋白,；
3.5待測蛋白的保存：待檢測濃度的蛋白存于-70℃,。

-20℃保存,，一年有效,。

1、為取得最佳的使用效果,，盡量避免過多的反復(fù)凍融,。建議可適當(dāng)分裝后使用；
2,、所有接觸樣品的用具及試劑均需預(yù)冷,。裂解蛋白的所有步驟都需在冰浴或4℃進(jìn)行,；
3,、試劑盒50T是按照6孔板的單孔細(xì)胞量計算,，實(shí)際使用中本套試劑足夠處理5g組織，或者1.25×108細(xì)胞,，最少細(xì)胞不宜少于0.1g組織或者2.5×106,。
4、結(jié)構(gòu)蛋白提取液含有SDS,使用中如有沉淀水浴加熱溶解即可,。
為了您的自身安全,，使用試劑前,，請做好防護(hù)，如穿實(shí)驗(yàn)服,，帶手套等,。