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線粒體復(fù)合體Ⅴ試劑盒說明書

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海研謹生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 更新時間 2025/1/14 11:27:24
  • 訪問次數(shù) 2156

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上海研謹生物科技有限公司提供RT-PCR技術(shù)服務(wù),、細胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù),、原位雜交技術(shù)服務(wù)、免疫沉淀技術(shù)服務(wù),、Western Blotting技術(shù)服務(wù),、PCR實驗服務(wù),并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的化學(xué)試劑,、生物學(xué)試劑,、免疫學(xué)檢測,,ELISA試劑盒、生化試劑盒,、分析標(biāo)準(zhǔn)品,、對照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),、食品安全檢測試劑,、動物疫病類檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑,、細胞培養(yǎng)服務(wù)等,,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域、食品安全領(lǐng)域,、聚合物研究領(lǐng)域,、環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域,客戶廣泛分布于食品,、制藥,、第三方檢測、環(huán)境測試機構(gòu),、化工,、科研院校、生物工程等行業(yè),。

主營:

1生化試劑,、標(biāo)準(zhǔn)品對照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),、

2.ELISA試劑盒,、分離液、分離液試劑盒

3.細胞:*細胞,、國產(chǎn)腫瘤細胞,、國產(chǎn)正常細胞、腫瘤耐藥細胞

4.食品安全檢測試劑,、動物疫病類檢測產(chǎn)品,、獸藥殘留檢測試劑

5.耗材:常用實驗耗材、移液器


公司主營: 各種實驗代做:WB代做,,免疫組化,,PCR代做,細胞檢測,,食品安全檢測試劑,,獸藥殘留檢測試劑,動物疫病類檢測,,銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,,對照品,,ELISA試劑盒,細胞,,血清,,等等

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè)

貨號YJ1219                                                規(guī)格:100管/48樣

線粒體復(fù)合體Ⅴ試劑盒說明書

微量法

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

線粒體復(fù)合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶,廣泛存在于動物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,由F1和F0兩個亞單位組成,。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學(xué)梯度催化ATP合成,,也可逆過程水解ATP。此外,,復(fù)合體Ⅴ還存在于葉綠體,、異養(yǎng)菌和光合細菌中。復(fù)合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關(guān)鍵酶,。

測定原理:

復(fù)合體Ⅴ水解ATP產(chǎn)生ADP和Pi,,通過測定Pi增加速率來測定復(fù)合體Ⅴ活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、臺式離心機,、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96 孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。

試劑的組成和配制:

試劑一:100mL×1 瓶,-20℃保存,;

試劑二:80mL×1 瓶,,-20℃保存;

試劑三:2mL×1 瓶,,-20℃保存,;

試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存,;臨用前加入2mL蒸餾水,,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;

試劑五:8mL×1 瓶,,4℃保存,;

試劑六:粉劑×1 瓶,4℃保存,;臨用前加入4mL蒸餾水,,充分混勻,;溶解后4℃保存一周;

試劑七:粉劑×1瓶, 4℃保存,;臨用前加入10mL蒸餾水,,充分混勻;溶解后4℃保存一周,;

試劑八:粉劑×1瓶, 4℃保存,;臨用前加入10mL蒸餾水,充分混勻,;溶解后4℃保存一周,;

試劑九:液體 10mL×1 瓶,室溫保存,。

定磷試劑的配制:按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制,,配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效,,若是藍色則為磷污染(請根據(jù)需要,,用多少配多少)。

注意:配試劑建議用新的燒杯,、玻棒和玻璃移液器,,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染,。

樣本的前處理:

組織,、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

① 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL試劑三,,用冰浴勻漿器或研缽勻漿,。

② 將勻漿 600g,4℃離心 5min,。

③ 棄沉淀,,將上清液移至另一離心管中,11000g,,4℃離心 10min,。

④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅴ(此步可選

做),。

⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體,,加入800uL試劑二和8uL試劑三,超聲波破碎(冰浴,,功率20%或200W,,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),,用于復(fù)合體Ⅴ酶活性測定,。

測定步驟:

  • 酶促反應(yīng)(在EP管中加入下列試劑)

試劑名稱(μL)

對照管

測定管

試劑四

20

20

試劑五

80

80

樣本

 

100

混勻, 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)準(zhǔn)確水浴 30min

試劑六

40

40

樣本

100

 

混勻,,4000g,,25℃離心 10min,取上清液

  • 定磷(在EP管或96孔板中加入下列試劑)

上清液

30

30

定磷試劑

170

170

混勻,,室溫靜置10min后,,在660nm處讀取A測定管和A對照管,計算ΔA=A測定管-A對照管,。每個測定管設(shè)一個對照管,。

復(fù)合體Ⅴ活性計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y= 1.2487x + 0.0361;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mmol/L),,y為A 值,。

1、組織中復(fù)合體Ⅴ活性的計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol無機磷定義為一個酶活性單位,。

復(fù)合體Ⅴ活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0361) ÷1.2487×V 反總×106]÷(V樣×Cpr) ÷T=64× (ΔA-0.0361) ÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度,。

(2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol無機磷定義為一個酶活性單位。

復(fù)合體Ⅴ活性(nmol/min /g 鮮重)=[(ΔA-0.0361) ÷1.2487×V 反總×106]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =51.7× (ΔA-0.0361) ÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol無機磷定義為一個酶活性單位,。

復(fù)合體Ⅴ活性(nmol/min/104cell)=[(ΔA-0.0361) ÷1.2487×V 反總×106]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.103× (ΔA-0.0361)

V 反總:反應(yīng)體系總體積,,2.4×10-4 L; V 樣:加入樣本體積,,0.1 mL,;V 樣總:加入提取液體積,0.808 mL,;T:反應(yīng)時間,,30 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,,g,;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬,。

b.使用96孔板測定的計算公式如下:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.624x + 0.0361,;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mmol/L),y 為A 值,。

1,、組織中復(fù)合體Ⅴ活性的計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol無機磷定義為一個酶活性單位。

復(fù)合體Ⅴ活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0361) ÷0.624×V 反總×106]÷(V 樣×Cpr) ÷T=128× (ΔA-0.0361) ÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol無機磷定義為一個酶活性單位,。

復(fù)合體Ⅴ活性(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA-0.0361) ÷0.624×V 反總×106]÷(W×V 樣÷V 樣總) ÷T=103.4× (ΔA-0.0361) ÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol無機磷定義為一個酶活性單位,。復(fù)合體Ⅴ活性(nmol/min /104cell)=[(ΔA-0.0361) ÷0.624×V 反總×106]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.206× (ΔA-0.0361)

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.4×10-4 L,;V 樣:加入樣本體積,,0.1 mL;V 樣總:加入提取液體積,,0.808 mL,;T:反應(yīng)時間,30 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,,g,;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬,。

 

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