免疫組化試劑盒使用說明書

工作原理：

辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000）,，它不會遮蓋抗原的結(jié)合部位,，具有較高活性及特異性，可溶性佳,，生成的產(chǎn)物不擴散，可作用于多種底物,，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強,，易進入細胞內(nèi)。DAB在 H2O2存在的情況下,，可以作為HRP的電子供體,，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑,。

試劑盒內(nèi)容：

自備試劑：無水乙醇,、蘇木素。

操作步驟：

1. 60℃常規(guī)脫蠟至水后,，將石蠟切片先后浸入二甲本苯Ⅰ,，二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水,，每次3-5 min,。

2.熱修復(fù)抗原： 將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液，微波爐加熱至沸騰后斷電,，間隔5-10 min后,，反復(fù)1-2 次，置于室溫自然冷卻,。0.01 mol/L  pH6.0的PBS洗滌3次,，每次5 min

3.消除內(nèi)源性過氧化物酶：用3% H ₂ O ₂ 室溫孵育 5-10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。PBS洗滌2-3次,，每次5 min,；

4.滴加一抗： 滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上，37℃孵育1小時左右或者4℃過夜,， pH7.4的PBS洗滌3次,，每次5 min 。（一抗的稀釋度,、孵育時間和溫度與染色強度,、背景有直接關(guān)系。一般來說,，陽性染色強度不夠時,，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時,，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間,。）

5.加入廣譜二抗，37℃孵育1小時,，取出后PBS洗滌3次,，每次5 min。

6.DAB顯色： 取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中,，配成DAB工作液,，滴加到切片上，室溫顯色,，鏡下控制反應(yīng)時間,。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng),。

7..觀察顯色后自來水沖,，蘇木目精復(fù)染1-2min，,，自來水沖10min,，梯度酒精脫水，二甲本苯透明,，中性樹膠封片,，干燥，分析拍照

免疫組化實驗代做報價
WB實驗代做報價
細胞粘附代做報價