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神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)說明書

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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司提供RT-PCR技術(shù)服務(wù),、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù),、原位雜交技術(shù)服務(wù)、免疫沉淀技術(shù)服務(wù),、Western Blotting技術(shù)服務(wù),、PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù),并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的化學(xué)試劑,、生物學(xué)試劑,、免疫學(xué)檢測(cè),ELISA試劑盒,、生化試劑盒,、分析標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品,、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),、食品安全檢測(cè)試劑、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品,、獸藥殘留檢測(cè)試劑,、細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)等,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域,、食品安全領(lǐng)域,、聚合物研究領(lǐng)域、環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域,,客戶廣泛分布于食品,、制藥,、第三方檢測(cè)、環(huán)境測(cè)試機(jī)構(gòu),、化工,、科研院校、生物工程等行業(yè),。

主營(yíng):

1生化試劑,、標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),、

2.ELISA試劑盒,、分離液、分離液試劑盒

3.細(xì)胞:*細(xì)胞,、國(guó)產(chǎn)腫瘤細(xì)胞,、國(guó)產(chǎn)正常細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞

4.食品安全檢測(cè)試劑,、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品,、獸藥殘留檢測(cè)試劑

5.耗材:常用實(shí)驗(yàn)耗材、移液器


公司主營(yíng): 各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,,免疫組化,,PCR代做,,細(xì)胞檢測(cè),,食品安全檢測(cè)試劑,獸藥殘留檢測(cè)試劑,,動(dòng)物疫病類檢測(cè),,銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,,ELISA試劑盒,,細(xì)胞,血清,,等等

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)簡(jiǎn)介:

經(jīng)HRP示蹤色液(TMB法)說明書

 

上個(gè)世紀(jì) 70 年代,,Kristensopn Olsson 報(bào)道了HRP可神經(jīng)末梢經(jīng)軸漿逆行運(yùn)至神經(jīng)元胞體,,經(jīng)組織化學(xué)方法可示出神經(jīng)元的廓,,從而發(fā)HRP  追蹤神經(jīng)示蹤技術(shù),即HRP 法,。3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)是非常優(yōu)越的試驗(yàn)顯,,能溶解于多有機(jī)溶和雙蒸水中,為穩(wěn)定的無色溶液,,不適量氧化或雙氧水不沖液混   勻后,,不氧化物作用產(chǎn)生清晰的藍(lán)產(chǎn)物,,極易察,在辣根氧化物的催化下 , TMB 會(huì)產(chǎn)藍(lán)色沉淀,,沉淀溶于水和乙醇,,色后呈藍(lán)色,可在察,。

經(jīng) HRP 示蹤色液(TMB )動(dòng)經(jīng)麻醉,、注入HRP后,游離或絡(luò)合型HRP 不氧化應(yīng)生成絡(luò)合物,,該絡(luò)合物氧化供TMB ,,呈藍(lán)色,在下清晰可,,該檢測(cè)DAB  法靈敏,。該顯色液用于科研領(lǐng)域,宜用于斷或其他用途,。

 

神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)說明書

產(chǎn)

 

 

 

 

50T

試劑(A): TMB assay buffer

2×500ml

RT 避 光

試劑(B): TMB  色液

30ml

-20℃ 避 光

試劑(C): TMB  強(qiáng)劑

2×1ml

RT

試劑(D): TMB Wash buffer(20×)

100ml

RT

 

 

 

操作步驟(供參考)

(一),、準(zhǔn)工作

1動(dòng)物麻醉:多用(3.5%)戊巴比麻醉,,大鼠的麻醉0.25-0.35ml/100g,。

2導(dǎo)HRP:有力注射法,、泳法以及周經(jīng)統(tǒng)的注射涂抹等法,。

3、確定動(dòng)物存活期,。

4,、動(dòng)物灌注:麻醉后,經(jīng)左心室升主動(dòng)脈插管行心內(nèi)灌注固定,。先用生理水或 PBS 快速灌注,。隨后用 4%的多聚甲固定液灌注,先快后慢,,時(shí)間控制在 30-40min,。后用 10% 蔗糖磷酸沖液(pH7.4)

5,、材:組織置于 20%的蔗糖磷酸鹽緩沖液中,,切片厚度 40μm,存于蔗糖磷酸鹽緩用,。

(二),、色反應(yīng)

1、配制 TMB孵育液:適量的TMB assay buffer TMB色液,,按 TMB assay bufferTMB色液=39:1 的比例混合,,即TMB孵育液,,即配即用,宜保存,。

2,、配制TMB色工作液:適量的TMB孵育液和TMB強(qiáng)劑,按TMB孵育液:TMB 強(qiáng)劑=200080001 的比例混合(具體比例應(yīng)根據(jù)具體時(shí)間摸索確定),,即TMB工作液,,即配即用,宜保存,。

3,、配制 1×TMB Wash buffer適量的TMB Wash buffer(20×),按TMB Wash buffer: 蒸=1:19 的比例混合,,即1×TMB Wash buffer,。室溫保存6個(gè)月有效。

4,、切片用蒸水清洗 3 次,,2min

5,、切片入10ml TMB孵育液(提前 20℃溫育),,避光孵育20min,其斷晃動(dòng),。

6,、切片入10ml TMB 色工作液(提前 20℃溫育),避光孵育 20min,,其斷晃動(dòng),。7、漂洗:10ml左右的1×TMB Wash buffer 漂洗切片2-3 次,,5min

8,、片,,玻片用明膠包被,室溫空氣干燥,。

9,、脫水、透明步驟按如下操作:

10s

②70%乙醇  10s

③95%乙醇  10s

④100%乙醇 2 次,,10s

二甲苯2次,,25min

  1. 中性膠封片,,藍(lán)色反應(yīng),。

 

注意事項(xiàng)

1,、如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀,表明TMB底物反應(yīng)過強(qiáng)烈,。

2,、所用器皿必須潔凈,避免含有氧化,,否會(huì)產(chǎn)生非特異性反應(yīng),。

3TMB色液避免反復(fù)凍融,,以免色效率下降,。

4TMB強(qiáng)劑注意密保存,,否則顯色效率下降,。

有效期: 12 個(gè)月內(nèi)有效。

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