神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)說明書
- 公司名稱 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/1/14 11:59:13
- 訪問次數(shù) 2968
聯(lián)系方式:楊小姐13585717991 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
公司主營(yíng): 各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,,免疫組化,,PCR代做,,細(xì)胞檢測(cè),,食品安全檢測(cè)試劑,獸藥殘留檢測(cè)試劑,,動(dòng)物疫病類檢測(cè),,銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,,ELISA試劑盒,,細(xì)胞,血清,,等等
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
---|
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)說明書
上個(gè)世紀(jì) 70 年代,,Kristensopn 和 Olsson 報(bào)道了HRP可神經(jīng)末梢攝取,經(jīng)軸漿逆行運(yùn)輸至神經(jīng)元胞體,,經(jīng)組織化學(xué)方法可顯示出神經(jīng)元的輪廓,,從而開發(fā)出 HRP 追蹤神經(jīng)元示蹤技術(shù),即為 HRP 法,。3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)是非常優(yōu)越的酶免試驗(yàn)顯色劑,,能溶解于多種有機(jī)溶劑和雙蒸水中,為穩(wěn)定的無色溶液,,不適量過氧化脲或雙氧水不緩沖液混 勻后,,不過氧化物酶作用產(chǎn)生清晰的藍(lán)色產(chǎn)物,,極易觀察,在辣根過氧化物酶的催化下 , TMB 會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色沉淀,,該沉淀不溶于水和乙醇,,顯色后呈藍(lán)色,可在顯微鏡下觀察,。
神經(jīng) HRP 示蹤顯色液(TMB 法)是動(dòng)物經(jīng)麻醉,、注入HRP后,游離或絡(luò)合型的 HRP 不氧化劑反應(yīng)生成絡(luò)合物,,該絡(luò)合物氧化供氫的 TMB 顯色劑,,呈藍(lán)色,在顯微鏡下清晰可見,,該檢測(cè)法較 DAB 法靈敏,。該顯色液僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途,。
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)說明書
產(chǎn)品組成 |
|
|
|
50T | |
試劑(A): TMB assay buffer | 2×500ml | RT 避 光 |
試劑(B): TMB 顯色液 | 30ml | -20℃ 避 光 |
試劑(C): TMB 增強(qiáng)劑 | 2×1ml | RT |
試劑(D): TMB Wash buffer(20×) | 100ml | RT |
操作步驟(僅供參考):
(一),、準(zhǔn)備工作
1、動(dòng)物麻醉:多用(3.5%)戊巴比托妥鈉作為麻醉劑,,大鼠的麻醉劑量為 0.25-0.35ml/100g,。
2、導(dǎo)入HRP:有壓力注射法,、電泳法以及周圍神經(jīng)系統(tǒng)的注射涂抹等法,。
3、確定動(dòng)物存活期,。
4,、動(dòng)物灌注:麻醉后,經(jīng)左心室升主動(dòng)脈插管行心內(nèi)灌注固定,。先用生理鹽水或 PBS 快速灌注,。隨后用 4%的多聚甲醛固定液灌注,先快后慢,,時(shí)間控制在 30-40min,。后用 10% 蔗糖磷酸緩沖液(pH7.4)。
5,、取材:取組織置于 20%的蔗糖磷酸鹽緩沖液中,,切片厚度 40μm,存于蔗糖磷酸鹽緩沖液備用,。
(二),、顯色反應(yīng)
1、配制 TMB孵育液:取適量的TMB assay buffer 和TMB顯色液,,按 TMB assay buffer: TMB顯色液=39:1 的比例混合,,即為 TMB孵育液,,即配即用,不宜保存,。
2,、配制TMB顯色工作液:取適量的TMB孵育液和TMB增強(qiáng)劑,按TMB孵育液:TMB 增強(qiáng)劑=2000~8000:1 的比例混合(具體比例應(yīng)根據(jù)具體時(shí)間摸索確定),,即為TMB顯色工作液,,即配即用,不宜保存,。
3,、配制 1×TMB Wash buffer:取適量的TMB Wash buffer(20×),按TMB Wash buffer: 蒸餾水=1:19 的比例混合,,即為 1×TMB Wash buffer,。室溫保存6個(gè)月有效。
4,、切片用蒸餾水清洗 3 次,,每次 2min。
5,、切片入10ml TMB孵育液(提前 20℃溫育),,避光孵育20min,其間不斷晃動(dòng),。
6,、切片入10ml TMB 顯色工作液(提前 20℃溫育),避光孵育 20min,,其間不斷晃動(dòng),。7、漂洗:取10ml左右的1×TMB Wash buffer 漂洗切片2-3 次,,每次 5min。
8,、貼片,,載玻片用鉻明礬明膠包被,室溫空氣干燥,。
9,、脫水、透明步驟按如下操作:
①蒸餾水 10s
②70%乙醇 10s
③95%乙醇 10s
④100%乙醇 2 次,,每次 10s
⑤二甲苯2次,,每次 2~5min。
- 中性樹膠封片,,顯微鏡下觀察藍(lán)色反應(yīng),。
注意事項(xiàng):
1,、如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀,表明TMB底物反應(yīng)過于強(qiáng)烈,。
2,、所用器皿必須潔凈,避免含有氧化劑或還原劑,,否則會(huì)產(chǎn)生非特異性反應(yīng),。
3、TMB顯色液避免反復(fù)凍融,,以免顯色效率下降,。
4、TMB增強(qiáng)劑注意密閉保存,,否則顯色效率下降,。
有效期: 12 個(gè)月內(nèi)有效。