大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,，無(wú)需添加任何成分，可直接用于大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞的培養(yǎng),。

成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系          500 ml

產(chǎn)品主要成分

原代成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基                            440 ml

原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)添加劑                            5 ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃,，避光，保存2個(gè)月,；?

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后,，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱,、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS,；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml,，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫,；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

小鼠苯(LPA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human general anscription complex (GTC) ELISA Kit 人通用轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(GTC)試劑盒

HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4ELISAKit 人周期素依賴性激酶4(CDK-4)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanbreastcancersusceptibilityprotein1,BRCA-1試劑盒人癌易感蛋白1(BRCA-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物組織細(xì)胞核高分離試劑盒10次

HumanSpecifieMacrophageArmingPaetot,SMAFELISAKit人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子(SMAF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠鹽皮質(zhì)激素受體(MR)試劑盒 ，英文名： MR ELISA Kit

Mouse thrombin aithrombin complex (TAT) ELISA Kit 小鼠抗復(fù)合物(TAT)試劑盒

MouseEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISAKit 小鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanComplemefragme3a,C3aELISAKit人補(bǔ)體片斷3a

細(xì)胞CASEINKINASE1δ激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitOFQ/N大鼠孤腓肽

兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISAKit   ELISA. 

兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISAKit   ELISA. 

兔子纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISAKit   ELISA. 

兔子纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISAKit   ELISA.

葡萄糖醛酸差向異構(gòu)酶抗體

轉(zhuǎn)錄因子ELYS蛋白抗體

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein

ADAMTS7 peptide 整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗原 0.5mgADAMTS7 peptide 整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗原

WWP2重組人 WWP2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 標(biāo)簽)

EPCAM Protein Rat 重屬

大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase 0.5mgCNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase) C型尿肽抗原

ANXA5 Protein Human 重組人 ANXA5 / Annexin Ⅴ / Annexin A5 蛋白

ACVRL1重組小鼠 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

IL13RA2 Protein Mouse 重組小鼠 IL13RA2 / CD213A2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

LSAMP重組人 LSAMP 蛋白  Protein

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌,、無(wú)污染，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè),。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè),。