?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套,，戴口罩,、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買(mǎi)已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌、無(wú)污染,，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè),。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類(lèi)型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌,、真菌等污染檢測(cè)。

人軟骨細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

人軟骨細(xì)胞永生化細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,，本產(chǎn)品可保持人軟骨細(xì)胞永生化細(xì)胞 優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人軟骨細(xì)胞永生化細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,，無(wú)需添加任何成分,，可直接用于人軟骨細(xì)胞永生化細(xì)胞的培養(yǎng)。

軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系           500 ml

產(chǎn)品主要成分

軟骨細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基                             440 ml

軟骨細(xì)胞培養(yǎng)添加劑                             5 ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃,，避光,，保存2個(gè)月；?

注意僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸,，立即用自來(lái)水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡,，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫(xiě)上細(xì)胞名稱、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml,，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫,；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原30(sCD30)Elisa 試劑盒 96T/48T

Human hydroxylysine (Hyl) ELISA Kit 人羥賴(Hyl)試劑盒

Humandesmogleins1,Dsg-1ELISAKit 人橋粒芯糖蛋白-1(Dsg-1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanalpha-1-microglobulin/bikuninprecursor,AMBP試劑盒人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物β-(β-AMYLASE)活性DNS比色法定量試劑盒20次

Mouse25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISAKit小鼠25羥基3(25(OH)D3/25HVD3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠血小板激活因子(PAF)試劑盒 ，英文名： PAF ELISA Kit

Mouse calf iestinal alkaline phosphatase (CIAP) ELISA Kit 小鼠牛小腸堿性0酸酶(CIAP)試劑盒

MouseVascularEndothelialcellGrowthFactorD,VEGF-DELISAkit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumancoagulationfactorII,FIIELISAKit人Ⅱ

細(xì)胞CDK6/CYCD1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitCAM大鼠鈣調(diào)素

豚鼠白介素6(IL-6)試劑盒   96T/48T

豚鼠白介素4(IL-4)試劑盒   96T/48T

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒   96T/48T

豚鼠白介素12(IL-12/P70)試劑盒   96T/48T

去整合素樣金屬蛋白酶18抗體

組蛋白H1抗體

HSPB1重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白 Protein

腎素(REN)重組蛋白 Recombinant Renin (REN)

MAPK14重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 標(biāo)簽) Protein

CTHRC1 Protein Human 重組人 CTHRC1 蛋白

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutin屬

人軟骨細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基Argireline peptide 抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3 1gArgireline peptide 抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3

GAD1 Protein Human 重組人 GAD67 / GAD1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CNDP2重組小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ACVR1 Protein Rat 重組大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白

GNGT1重組人 GNGT1 / GNG1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein