貓主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

貓主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測(cè)試,，本產(chǎn)品可保持貓主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含貓主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分,，可直接用于貓主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞的培養(yǎng),。

內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系          500 ml

產(chǎn)品主要成分

內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基                         465 ml

內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑                         5 ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光,，保存2個(gè)月,；?

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細(xì)胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

小鼠肝病毒抗體(HV-Ab)試劑盒

Human decay accelerating factor (DAF/CD55) ELISA Kit 人衰變加速因子(DAF/CD55)試劑盒

Humaissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanAi-titinAibody,TTN試劑盒人抗肌聯(lián)蛋白抗體(TTN)試劑盒

植物氧化型(GSSG)濃度熒光定量試劑盒50次

Humanansforminggrowthfactorα,，TGF-αELISAKit人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)試劑盒

大鼠血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶1(ADAMTS1)試劑盒 ，英文名： ADAMTS1 ELISA Kit

Mouse embryonic stem cell line MESPU30 (M30) ELISA Kit 小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)試劑盒

MouseVascularEndothelialcellGrowthFactorC,VEGF-CELISAkit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanc-junELISAKit人c-jun

細(xì)胞CDK7/CYCLINH激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitCAMK2大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2

豚鼠P物質(zhì)   英文名稱：   Guinea pig Substance P   規(guī)格：      英文縮寫：   SP

豚鼠睪激素   英文名稱：   Guinea pig Testosterone   規(guī)格：      英文縮寫：   TESTO

豚鼠免疫球蛋白E   英文名稱：   Immunoglobulin E   規(guī)格：      英文縮寫：   IgE

豚鼠粘多糖   英文名稱：   Mucopolysaccharide   規(guī)格：      英文縮寫：   MLC

染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白1抗體

組蛋白賴N-甲基轉(zhuǎn)移酶2B抗體

GGT1重組大鼠 GGT1 蛋白 Protein

Fibulin 1 衰老關(guān)鍵蛋白抗原 0.5mgFibulin 1 衰老關(guān)鍵蛋白抗原

HSF1重組人 HSF1 / HSTF1 蛋白 Protein

GPR114 Protein Human 重組人 GPR114 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

EPHA4 Protein Mouse 重組小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)

貓主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基NF2/merlin(neurofibromatosis type 2 0.5mgNF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神經(jīng)纖維瘤抗原

GADD45G Protein Human 重組人 GADD45G / CR6 蛋白

LGMN重組野豬 Legumain / LGMN / AEP 蛋白 Protein

CCNE1 Protein Mouse 重組小鼠 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

TNFRSF8重組人 CD30 / TNFRSF8 蛋白 Protein

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染,，使用前需進(jìn)行無菌檢測(cè),。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌,、真菌等污染檢測(cè)。