人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA檢測(cè)試劑盒保存方法
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- 公司名稱 上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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- 更新時(shí)間 2017/7/18 10:22:51
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動(dòng)物血清,,標(biāo)準(zhǔn)品、ELISA試劑盒,、對(duì)照品,、生化試劑、大鼠試劑盒,、質(zhì)粒提取試劑盒
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中文名:人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒
別名:人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA Kit
供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格:48t/96t
保存溫度:2-8℃
有效期:6個(gè)月
特點(diǎn):靈敏性高,、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好,。
使用范圍:僅供科研使用,不得用于臨床,。
產(chǎn)品用途:用于測(cè)定人血清,血漿,組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性,。
檢測(cè)種屬:大小鼠,人,豚鼠,兔子,豬,犬,牛羊,雞鴨ELISA試劑盒等種屬,。
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本,。例如適合檢測(cè)包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、灌洗液、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等標(biāo)本。
本司ELISA試劑盒優(yōu)點(diǎn):
1,、專業(yè)的elisa試劑盒生產(chǎn)企業(yè)(ELISA檢測(cè)試劑盒廠家)
2,、*抗體----高效、靈敏,、特異
3,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,吸附性好,,空白值低,,孔底透明度高
4、良好的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,,可靠性強(qiáng)
5,、購(gòu)買本公司的ELISA試劑盒,免費(fèi)代檢測(cè),,上海地區(qū)免費(fèi)上門取樣
6,、技術(shù)服務(wù)要求:專業(yè),規(guī)范,,高效
7,、適用于血漿、血清,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣本,。
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA檢測(cè)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知AGEs濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP,。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,,然后加入底物A,、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關(guān)系。
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:
1. 人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒報(bào)價(jià)請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,,平衡至室溫,。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃,。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,,屬于正常現(xiàn)象,,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過(guò)50℃,,使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫)。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘,,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,,旋緊管蓋,靜置10分鐘,,上下顛倒數(shù)次,,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為10ng/mL,。),。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL,。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,,混勻即可,其余濃度依此類推,。
4. 生物素化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),,實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度,。
5. 酶結(jié)合物工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL,。使用前15分鐘,,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度,。
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA檢測(cè)試劑盒保存方法及樣品收集、處理:
1,、 血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,,取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒技術(shù)原理:
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。
(2). 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
(3). 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,,又保留酶的活性,。
(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。
(5). 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應(yīng)的底物后,,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析,。測(cè)定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),,并且重復(fù)性好,。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:
1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔,、陽(yáng)性對(duì)照2 孔,、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),。
2. 加樣:分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl,。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用,。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15 分鐘。
8. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
9. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA檢測(cè)試劑盒保存方法性能:
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于(參考說(shuō)明書(shū))
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
4. 重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,,避光防潮保存,。
6. 有效期:6個(gè)月。
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