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乙酰膽堿酯酶(AChE)活性發(fā)光檢測(cè)方法

來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2018年08月17日 09:32  

    乙酰膽堿(acetylcholine,ACh)是一種神經(jīng)遞質(zhì),,能特異性的作用于各類(lèi)膽堿受體,。乙酰膽堿參與神經(jīng)遞質(zhì)過(guò)程,,在下一次神經(jīng)沖動(dòng)開(kāi)始前乙酰膽堿會(huì)被AChE 降解掉,。AChE 會(huì)被神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲(chóng)劑所抑制,,由于神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲(chóng)劑對(duì)人和動(dòng)物的嚴(yán)重毒副作用而成為很多科學(xué)家所關(guān)注的一個(gè)領(lǐng)域,。另外,,在一些疾病治療過(guò)程中,,例如在Alzheimer's 疾病中,,研究人員也對(duì)AChE 抑制劑可能產(chǎn)生的功能進(jìn)行了研究。


    AChE 活性檢測(cè)試劑盒使用乙酰膽堿經(jīng)過(guò)一系列酶促反應(yīng),,在發(fā)光反應(yīng)中快速地將反應(yīng)中活性AChE 的量以光信號(hào)形式輸出,。樣品中的AChE 抑制劑的存在使得樣品中ATP 水平升高,這可以通過(guò)發(fā)光來(lái)定量,。


    檢測(cè)方法:
    以aCella – AchE檢測(cè)試劑盒為例
    1. 試劑準(zhǔn)備
    將A,、B、C三個(gè)溶液分別避光溶解,,并且平衡到室溫,。
    2. 樣品準(zhǔn)備
    對(duì)照1:加入溶液50ulC,不包含AChE,,代表100%抑制
    對(duì)照2:加入溶液50ulA,,不加入樣品或抑制劑,,代表無(wú)抑制
    樣品:加入10-50ul樣品或抑制劑,重復(fù)設(shè)置三個(gè)復(fù)孔
    對(duì)以上所有待測(cè)液加入50ul溶液B
    3. 檢測(cè)結(jié)果
    次檢測(cè)時(shí),,可以對(duì)單個(gè)樣品多次檢測(cè)發(fā)光,,每次間隔30秒,以確定反應(yīng)的穩(wěn)定時(shí)間,。
    然后所有樣品在這個(gè)時(shí)間點(diǎn)上檢測(cè)發(fā)光值,。

 

    參考文獻(xiàn):
    Schallreuter KU et al. Activation/deactivation of acetylcholinesterase by H2O2: more evidence for oxidative stress in vitiligo. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Mar 5;315(2):502-8.
    Bolognesi ML et al. Propidium-based polyamine ligands as potent inhibitors of acetylcholinesterase and acetylcholinesterase-induced amyloid-beta aggregation. J Med Chem. 2005 Jan 13;48(1):24-7.

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