人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
- 公司名稱 上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2019/12/17 11:25:12
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動(dòng)物血清,,標(biāo)準(zhǔn)品,、ELISA試劑盒、對(duì)照品,、生化試劑,、大鼠試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒
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中文名:人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA試劑盒
別名:人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA kit
供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格:48t/96t
保存:2-8℃
有效期:6個(gè)月
標(biāo)本:血清,、血漿,、細(xì)胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等,。
使用范圍:僅供科研使用,不得用于臨床,。
用途:用于測(cè)定人血清,血漿,組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。
性能:敏感性高,,特異性強(qiáng),,重復(fù)性,。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定,。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果,。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素,;
③操作因素,。
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA試劑盒主要特點(diǎn):
專一性強(qiáng):抗原與抗體的免疫反應(yīng)是專一反應(yīng),而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),,所檢測(cè)的對(duì)象是抗原(或抗體),,使用的抗體除標(biāo)記了酶以外,與普通抗體的免疫反應(yīng)特性并無(wú)多大差別,。
靈敏度高:由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶,,因此,借助于酶與底物的顯色反應(yīng),,顯示抗原與抗體的結(jié)合,,大大提高了檢測(cè)的靈敏性,使檢測(cè)水平接近放射免疫測(cè)定法,。
樣品易保存:經(jīng)過(guò)酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定,,因此有利于樣品的保存。
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA檢測(cè)試劑盒原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,。
標(biāo)本的處理:
(1)細(xì)胞培養(yǎng)上清液
根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品,,然后按照說(shuō)明書(shū)所述方法檢測(cè)。推薦稀釋濃度是稀釋5倍,。
(2)腦脊液
根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品,,然后按照說(shuō)明書(shū)所述方法檢測(cè)。推薦稀釋濃度是5倍,。
(3)血漿
①用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液,,5,000×g,15分鐘,,4℃,,分離血漿樣品,然后儲(chǔ)存在零下80℃直到使用,。
②用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液126倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質(zhì)影響檢測(cè),,按照說(shuō)明書(shū)方法檢測(cè)。
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)注意事項(xiàng):
1.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì),。
2.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存。
3.使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器,。
4.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
5.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
6.使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
7.加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
8.按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
9.底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA試劑盒液體類標(biāo)本:
包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。
1)血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
3)尿液:
用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行,。
4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分),。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
5)組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),,其余冷凍備用。
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA試劑盒適用領(lǐng)域:
1.免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位
2.研究抗酶抗體的合成
3.顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)
4.定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟:
1.加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,,37℃孵育2小時(shí),。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
2.棄去液體,,甩干,每個(gè)孔中加入detection ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),,酶標(biāo)板加上覆膜,,37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,,大約350μl /每孔,,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加hrp conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,,加上覆膜,,37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板5次,方法同步驟3,。
6.每孔加底物溶液100μl,,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯況酌情縮短或延長(zhǎng),但不可超過(guò)30分鐘,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),,即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng),,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(od值),。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源,,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測(cè)程序,。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束,。
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA試劑盒基本原理:
①抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性,;
②抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,,仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
③酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例,因此,,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果,。
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