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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>abs60371 SfiI

abs60371 SfiI

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愛必信（上海）生物科技有限公司是一家從事生物學(xué)試劑及耗材的高新技術(shù)企業(yè),。公司秉承“為生命科學(xué)創(chuàng)造便利！為客戶創(chuàng)造價值,！為員工創(chuàng)造幸福人生,！”的發(fā)展理念，擁有專業(yè)的產(chǎn)品研發(fā)質(zhì)檢團隊,、市場營銷團隊及*倉儲物流等管理團隊,。榮獲2021年度上海市“專精特新”企業(yè)稱號。

自營品牌Absin®,，主要經(jīng)營產(chǎn)品有：生化試劑（常用生化試劑,、生物學(xué)實驗常用試劑、熒光染料,、激動劑/抑制劑,，植物提取物）、細胞生物學(xué)（細胞培養(yǎng)產(chǎn)品,、血清,、基質(zhì)膠,、添加劑、檢測試劑盒）,、免疫學(xué)產(chǎn)品,、分子生物學(xué)產(chǎn)品、實驗室儀器/耗材,、產(chǎn)品定制和檢測服務(wù),。

Absin還提供一些特色產(chǎn)品：霍亂毒素B亞單位（CTB）、 雞胚提取物（CEE）,、 牛腦垂體提取物,、 呼吸爆發(fā)試劑盒、 多色免疫組化試劑盒,、 mRNA原料等在業(yè)界深受客戶喜歡,。

Absin秉承踏實，務(wù)實,，求精和不斷創(chuàng)新的精神為中國科學(xué)家提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,，努力打造屬于中國自己的生物試劑品牌，為廣大科學(xué)家提供更全面更豐富更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,。

愛科研,，必信它(Absin)！Absin努力成為你身邊的科研百寶箱,！






生化試劑,，分子生物學(xué)試劑，血清,，細胞培養(yǎng)試劑,，化學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑,，耗材,，儀器，定制服務(wù)

CAS - 純度 -
分子量 - 分子式 -
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T
貨號 abs60371 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合
主要用途 -
產(chǎn)品描述
描述

SfiI 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶,，適用于質(zhì)粒 DNA,、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優(yōu)良的活性,，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切,。此外，去磷酸化,、連接試劑在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性,，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切 - 修飾 - 連接”的體驗,。CutOne Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料,，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳,。CutOne Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近,。


識別位點：
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'


建議反應(yīng)條件：
1× CutOne™ 緩沖液,；
50℃溫育；
參照“DNA 快速酶切流程”配制反應(yīng)體系,。


失活條件：
不可熱失活，請使用酚氯仿抽提或柱純化,。


產(chǎn)品組成：

組分規(guī)格
SfiI100 μl
10× CutOne Buffer1 ml
10× CutOne Color Buffer1 ml
使用方法
使用方法
1,、DNA 快速酶切流程
（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：
組分質(zhì)粒 DNAPCR 產(chǎn)物基因組 DNA
ddH2O15ul16ul30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer2ul3ula5ul
底物 DNA2ul (up to 1ug)10ul (~0.2ug)10ul (5ug)
SfiI1ul1ul5ul
Total20ul30ul50ul

a. 本體系適用于經(jīng)過純化的 PCR 產(chǎn)物酶切。未純化的 PCR 產(chǎn)物具備一定的離子強度,，10× Cutone Buffer 加入量可適當減少至 2 μl,。但由于 DNA 聚合酶同時具有外切酶活性，會影響酶切產(chǎn)物,，因此如下一步需進行（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋）,，然后瞬時離心以收集掛壁液滴；
（3）50℃溫育 15 min（質(zhì)粒）,，或 15~30 min（PCR 產(chǎn)物）,，或 30~60 min（基因組 DNA）；
（4）酚氯仿抽提或柱純化（可選）,；

（5） 如果使用 CutOne Color Buffer 進行酶切反應(yīng),，得到的產(chǎn)物可以直接進行上樣電泳。


2,、雙酶切或多酶切
（1）每種快速內(nèi)切酶的用量為 1 μl,，并根據(jù)需要適當擴大反應(yīng)體系；
（2） 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的 1/10,；

（3）如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同,，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶,，在其最適反應(yīng)溫度下進行酶切反應(yīng),。


3、適用于質(zhì)粒的擴大反應(yīng)體系
DNA1ug2ug3ug4ug5ug
SfiI1ul2ul3ul4ul5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer2ul2ul3ul4ul5ul
Total20ul20ul30ul40ul50ul
不同 DNA 中的酶切位點數(shù)量
λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
00000103

甲基化修飾影響

DamDcmCpGEcoKIEcoBI
無影響剪切受影響剪切受影響無影響無影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性


CutOne Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性100%100%100%100%
儲存/保存方法
-20°C 及以下運輸及保存,，長期保存建議放 80°C ,。有效期2年。
技術(shù)指標
質(zhì)量控制：
功能活性檢測：
50℃下,，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中,，1 μl SfiI 能夠在 15 min 內(nèi)消化 1 μg pEPE DNA。
超長時間溫育檢測：
50℃下,，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中,，將 1 μl SfiI 與 1 μg pEPE DNA 共同溫育 3 h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。更長時間酶切可能出現(xiàn)星號活性,。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測：
50℃下,，使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物，回收酶切產(chǎn)物,，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過 95%的酶切產(chǎn)物重新連接,。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開 95% 以上的連接產(chǎn)物,。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測：
50℃下,，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中將 1 μl SfiI 與 1 μg 超螺旋質(zhì)粒 DNA 共同溫育 4 h 后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,，少于 10% 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài),。
溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究



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