ELISA檢測試劑盒原理：

采用雙抗體夾心法測定人雄激素結合蛋白（ABP）水平,。用純化的人雄激素結合蛋白（ABP）抗體包被微孔板，制成固相載體,，實驗時依次在微孔板中加入樣本及標準品,，并加入HRP標記的ABP抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，反復洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應,，轉變成黃色,。顏色的深淺和樣品中的ABP含量呈正相關。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度（OD值）,，根據(jù)標準曲線,，計算測試樣品中ABP濃度。 

elisa檢測試劑盒RD實驗材料與試劑配制：

1. 儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘）,，微量加液器,、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙,。

2. 緩沖液使用：加5ul的緩沖液于50ul的樣品中,，如果樣品量不夠或者不確定，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可,?；靹颍o置1小時備用（如果標本是血清或者血漿,，此步驟忽略）,。

3. 洗液的配制：按1：100的比例配制洗液備用。

樣品收集,、處理及保存：

1. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份,。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104-106/ml左右,，通過反復凍融,，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或者細胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測,。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測。

4. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。

5. 體液：包括胸腹水,、腦脊液，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
6. 組織標本：切取組織標本,，稱取重量0.5mg，加入500ul的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標本勻漿,，以2000-3000rmp離心20分鐘，收集上清進行檢測,。

7. 樣品中不能含有NaN3,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測,，應將其分裝，-70 ℃保存,，避免反復冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心,。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

elisa檢測試劑盒RD操作步驟：

1. 取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘,。

2. 分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設標準品組（6個濃度）、空白孔,、待測樣品組,。

注：為減少實驗誤差，保證準確性,，建議設置復孔,。

3. 加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中加入 50ul的待測樣本,。

4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入100ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）,。

5. 溫育：酶標板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置15-30s,，充分清洗酶標板5次，用吸水紙拍干,。

7. 顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后,，再加入顯色劑B液50ul。

8. 終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液,。

9. 讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值,。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內(nèi),，以免影響準確性,。

注意事項：

1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染,。

2. 加樣：加樣時,，要控制加樣速度，避免孔與后一孔間的時間間隔過大,，否則將會導致不同的預孵育時間,，從而影響實驗的準確性以及重復性。

3. 孵育：嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行,。

4. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,。

5. 建議實驗前預測樣品含量,，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋,，計算結果時乘以相應的稀釋倍數(shù),。

6. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本）,，如果對本試劑盒有任何疑問,，可和所購經(jīng)銷商溝通，如果因運輸過程導致試劑盒失效,，可要求調換,，但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。

安全性：

避免人體直接接觸顯色劑A,、B和終止液,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。

實驗中不要進食,、抽煙或使用化妝品。

不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

保存條件及有效期：

試劑盒保存：2-8℃

有效期：6個月