腫瘤細胞轉(zhuǎn)染方法不同,,對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響很大。常見的轉(zhuǎn)染方法有:
1. 磷酸鈣法:該方法利用磷酸鈣DNA 復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞原理得到瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果,操作簡便但重復性差,,不可用于原代細胞的轉(zhuǎn)染,。
2. DEAE-右旋糖苷法:帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞,可用于瞬時轉(zhuǎn)染,,方法相對簡便,、結(jié)果可重復但對細胞有一定的毒副作用。
3. 電穿孔法:利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位,,DNA通過膜上形成的小孔導入,。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染均適用,。適用性廣但細胞致死率高,,DNA 和細胞用量大, 需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件,。
4. 病毒介導法:通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中,。適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,可用于難轉(zhuǎn)染的細胞,、原代細胞,,體內(nèi)細胞等。
5. 陽離子脂質(zhì)體法:帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞從而形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時性轉(zhuǎn),。該方法適用性廣,,轉(zhuǎn)染效率高,重復性好,,但轉(zhuǎn)染時需除血清,。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大,。
6. 腫瘤細胞顯微注射法:用顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核,,適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限,,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞,。
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