材料:淋巴細(xì)胞株懸液、1%SRBC懸液,、滅活之小牛血清、離心管、試管,、吸管,、載玻片,、0.8%戊二醛,、瑞氏染液,。
方法
(1)取上述配好之淋巴細(xì)胞懸液0.1ml于潔凈小試管中,加入1%SRBC懸液0.1ml,。再加入小牛血清0.1ml,混勻,,置37℃水浴箱中5分鐘,,500轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,,放4℃冰箱2-24小時(shí),。
(2)從冰箱中取出試管,留適量上清液,,輕輕搖勻,,加0.8%戊二醛2滴,輕搖后,,置4℃冰箱15分鐘,,取出,作成涂片,,待自然干燥,,以瑞氏染液染色。
(3)計(jì)數(shù):鏡下觀察,,凡結(jié)合三個(gè)以上SRBC的T細(xì)胞株即為E-RFC,,計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞,求出E-RFC占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分率,。
結(jié)果
一般認(rèn)為E-RFC的正常值在60%以上,,如少于50%則為低下。如欲分離T細(xì)胞,,可用密度梯度離心,,E-RFC因比重增大而沉于管底,與其他細(xì)胞株分離,;用低滲法裂解花結(jié)中的SRBC,,即可獲得純化的T細(xì)胞。
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