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人外周T細胞的分離與鑒定

來源:上海研生實業(yè)有限公司   2017年04月27日 14:05  

材料:淋巴細胞株懸液、1%SRBC懸液,、滅活之小牛血清,、離心管、試管,、吸管,、載玻片、0.8%戊二醛,、瑞氏染液,。 

方法
(1)取上述配好之淋巴細胞懸液0.1ml于潔凈小試管中,加入1%SRBC懸液0.1ml,。再加入小牛血清0.1ml,,混勻,,置37℃水浴箱中5分鐘,500轉/分,,離心5分鐘,,放4℃冰箱2-24小時。 
(2)從冰箱中取出試管,,留適量上清液,,輕輕搖勻,加0.8%戊二醛2滴,,輕搖后,置4℃冰箱15分鐘,,取出,,作成涂片,待自然干燥,,以瑞氏染液染色,。 
(3)計數:鏡下觀察,凡結合三個以上SRBC的T細胞株即為E-RFC,,計數200個淋巴細胞,,求出E-RFC占淋巴細胞總數的百分率。 
結果
一般認為E-RFC的正常值在60%以上,,如少于50%則為低下,。如欲分離T細胞,可用密度梯度離心,,E-RFC因比重增大而沉于管底,,與其他細胞株分離;用低滲法裂解花結中的SRBC,,即可獲得純化的T細胞,。 

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