產(chǎn)品名稱：GBC-SD 人膽囊癌細胞

規(guī)格：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細胞一瓶
特點：細胞代數(shù)為4-5代左右
包裝：內(nèi)層無菌自封袋,；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋,；說明書
細胞來源：ATCC,、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運輸方式：快遞運輸
售后：收到細胞后7天,，如發(fā)現(xiàn)細胞有質(zhì)量問題（如污染,，死亡，快遞運輸?shù)仍颍r,，應出具書面質(zhì)量問題報告并及時傳真或致銷售人員,，我們將盡快為您解決。

細胞培養(yǎng)常見問題分析

細胞培養(yǎng)
1,、冷凍管應如何解凍,？
取出冷凍管后， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍,， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形,。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,， 必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂,。hFOB 1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞

2,、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時， 是否應馬上去除DMSO,？

除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外,， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）,， 在解凍之后， 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,？GBC-SD 人膽囊癌細胞
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,， 細胞大都無法立即適應， 造成細胞無法存活,。
4,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能,。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,， 所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
5,、何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS （fetal bovine serum） 和FCS （fetal calf serum） 是相同的意思,， 兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼,， 請不要再使用,。CS （calf serum） 則是指小牛血清。HS （horseserum） 則是指馬血清,。
6,、培養(yǎng)細胞時應使用5 % 或10% CO2？或根本沒有影響,？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng),， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2 濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,，細胞培養(yǎng)時應使用10 % CO2,；當培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時， 則應使用5 % CO2 培養(yǎng)細胞,。
7,、何時須更換培養(yǎng)基？
視細胞生長密度而定,， 或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,，按時更換培養(yǎng)基即可,。
8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素,？
除于特殊篩選系統(tǒng)中外,， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下， 培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素,。
9,、附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度？應如何處理,？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na,。*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中， 保存于–20 ℃,，避免反復冷凍解凍造成trypsin 之活性降低,， 并可減少污染之機會。
10,、懸浮性細胞應如何繼代處理,？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,， 稀釋細胞濃度即可,， 若培養(yǎng)液太多時， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,， 直到無法容納為止,。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,， 重復前述步驟即可,。
11、欲將一般動物細胞離心下來,，其離心速率應為多少轉(zhuǎn)速,？
欲回收動物細胞， 其離心速率一般為300xg （約1,000rpm）,，5 - 10 分鐘,， 過高之轉(zhuǎn)速， 將造成細胞死亡,。
12,、細胞之接種密度為何？

依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可,。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因,。
13、細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何,？
動物細胞冷凍保存時zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide） 和90 - 95 % 原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之,。注意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能,， 故不可將DMSO 直接加入細胞液中， 必須使用前先行配制完成,。
14,、DMSO 之等級和無菌過濾之方式為何？

a D2650）,， 其本身即為無菌狀況,， *次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中， 保存于4°C,， 避免反復冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì),， 并可減少污染之機會。若要過濾DMSO,， 則須使用耐DMSO 之Nylon 材質(zhì)濾膜,。
15、冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
15,、細胞欲冷凍保存時,， 細胞冷凍管內(nèi)應有多少細胞濃度？
冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial,， 融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜,。
16、應如何避免細胞污染,？
細胞污染的種類可分成細菌,、酵母菌、霉菌,、病毒和霉?jié){菌,。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳,、污染之血清和污染之細胞等,。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法,。
17,、如果細胞發(fā)生微生物污染時，應如何處理,？
加入相應抗生素,。直接滅菌后丟棄之。
18,、支原體（mycoplasma） 污染的細胞,， 是否能以肉眼觀察出異狀？
不能,。除極有經(jīng)驗之專家外,，大多數(shù)遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之,。
19,、支原體污染會對細胞培養(yǎng)有何影響？
支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數(shù),， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù),。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free,，實驗結果之數(shù)據(jù)方有意義,。
20、CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔,？
定期（至少每兩周一次） 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之,。
21,、為何培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中,， 顏色會偏暗紅色， 且pH值會越來越偏堿性,？
培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中,， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑（通常為phenol red） 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅,。培養(yǎng)基偏堿之結果， 將造成細胞生長停滯或死亡,。若培養(yǎng)基偏堿時,， 可以通入無菌過濾之CO2， 以調(diào)整pH 值,。
22,、各種細胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同？
不同廠牌的dish 或flask,， 其所coating 的polymer 不同,， 制造程序亦不同， 雖對大部分細胞沒有太大之影響,， 惟少數(shù)細胞則可能因使用廠牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長差異,。
23、購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后,，為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形,？ 購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,， 常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳,。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤,。冷凍細胞解凍后,， 加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞,。培養(yǎng)溫度使用錯誤,。細胞置于–80℃太久。
24,、收到之冷凍管瓶身破裂,，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因,？
冷凍管瓶蓋裂紋,，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,，造成冷凍管裂損,，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時,，均應立刻將冷凍管再一次扭緊 ,。
25、如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基,？
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件,。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長,?？傊?，*MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始,，各種目的無血清培養(yǎng)*AIM V（12005）培養(yǎng)基（SFM）,。
26、L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎,？它在溶液中不穩(wěn)定嗎,？
L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,，但是確切的降解率一直沒有zui終定論,。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性,。
27,、GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I,？這個二肽有多穩(wěn)定,？
GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護,。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,，即使在121磅滅菌20分鐘,，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解，如果在相同條件下,，L-谷氨酰胺幾乎*降解,。
28、什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色,，酸性時為黃色，堿性時為紫色,。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用,，（特別是雌激素）,。為避免固醇類反應，培養(yǎng)細胞,，尤其是哺乳類細胞時,，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時,，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。
29、培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么,？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是,，如果沒有葡萄糖的話,，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
30,、二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎,？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？
二價離子的確抑制胰蛋白酶活性,。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,，用EDTA清洗細胞,，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。
31,、書上說,，Hank‘s 平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱,。原因是什么,？Hank’s 平衡鹽溶液（HBS）和Earle‘s平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles （2.2g/L）中比在Hanks （0.35g/L） 中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,，溶液會變堿,，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,，需要用Eagles液,，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,，用Hanks液就可以了,。